Жирорастворимые витамины ВЭЖХ

[Zorka]

Здравствуйте! Определяем витамины А, Е в мультивитаминном препарате для животных ( матрица -автолизат дрожжей, лактоза, сухое молоко). Колонка Wakosil II 18HG 5μm 150х4,6 HG, ПФ 99% метанол, УФ детектирование, скорость подачи элюента 1 мл/мин.
Пробоподготовка — гидролиз 0,05М Hсl (5 мин. УЗВ, 60 градусов), затем экстракция диэтиловым эфиром (5 мл, 5 мин.), потом экстракция этанолом (10 мл, 5 мин.), доводим объем до 50 мл этанолом, фильтруем, вкалываем.
Проблема — содержание витамина А на 40-50% меньше, чем вложено при приготовлении таблеток.
Как вы думаете, витамин А недоизвлекается при пробоподготовке или теряется при приготовлении таблеток? Какие пути решения данной проблемы? Заранее спасибо!

[Zorka]

Спасибо за совет, но мы вкалываем стандарты — А выходит на 5 минуте, Е на 13. В пробе три пика — на 3 минуте, на 5-ой и на 13-ой. Т.е. Пик витамина А на хроматограмме пробы присутствует.

[Zorka]

Спасибо, попробуем.

[shoker]

А метод внутреннего стандарта не? *У Вас всё-таки имеется стадия экстракции при пробоподготовке

[Zorka]

А что посоветуете в качестве внутреннего стандарта?

[shoker]

Ацетат витамина А, например. В условиях пробоподготовки вроде бы сдохнуть не должен. Мне так кажется, что концентрация солянки 0,05М для этого маловата. Кроме того, на С18 он должен отделяться от самого витамина А, надо только с условиями поработать.
*В литературе его тоже рекомендуют: K.L. Johnson-Davis et al. / Clinica Chimica Acta 405 (2009) 35–38