После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI)
После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI)
Доброго всем времени суток!
Пролема такова: после каждого выхода положетельного пика (любого моно- или дисахарида) через минуту появляется отрицательный пик, пропорциональный по высоте концентрации вещества. При этом отрицательные пики присутсвуют у всех низкомолекулярных сахаров. То есть на 3 вещества приходиться 3+1 положительных пика и 3+1 отрицательных (+1 это t0).
Появились эти пики после того, как купил новую колонку предназначенную для сахаров(Zorbax carbohydrate analysis). В старой колонке был только один отрицательный пик, который шел через пару минут после t0, но никак не после каждого соединения.
ПФ: 75% АCN 25%H2O.
Образец вначале был расторен в воде, потом в 50% на 50% ACN/H2O (как в спецификации), потом в подвижной фазе.
В подвижной фазе отрицательные пики от t0 пропали, но остались и не уменьшились отрицательные пики от сахаров, и все так же пропорциональны по высоте к положительным.
Сняв колонку и подключив напрямую к рефрактометру, никаких отрицательных пиков обнаружено не было.
Все дело в равновесии колонки?
Если так, что как долго эквилибрировать колонку что бы с ней можно было работать?
Пролема такова: после каждого выхода положетельного пика (любого моно- или дисахарида) через минуту появляется отрицательный пик, пропорциональный по высоте концентрации вещества. При этом отрицательные пики присутсвуют у всех низкомолекулярных сахаров. То есть на 3 вещества приходиться 3+1 положительных пика и 3+1 отрицательных (+1 это t0).
Появились эти пики после того, как купил новую колонку предназначенную для сахаров(Zorbax carbohydrate analysis). В старой колонке был только один отрицательный пик, который шел через пару минут после t0, но никак не после каждого соединения.
ПФ: 75% АCN 25%H2O.
Образец вначале был расторен в воде, потом в 50% на 50% ACN/H2O (как в спецификации), потом в подвижной фазе.
В подвижной фазе отрицательные пики от t0 пропали, но остались и не уменьшились отрицательные пики от сахаров, и все так же пропорциональны по высоте к положительным.
Сняв колонку и подключив напрямую к рефрактометру, никаких отрицательных пиков обнаружено не было.
Все дело в равновесии колонки?
Если так, что как долго эквилибрировать колонку что бы с ней можно было работать?
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI
В файле две хроматограммы:
Первая со стандартами в мобильной фазе, а вторая просто бланк(вода). Как видно их хроматограм, негативные пики идут через 1,5 минуты (или 1 обьем колонки) после выхода положительных.
Первая со стандартами в мобильной фазе, а вторая просто бланк(вода). Как видно их хроматограм, негативные пики идут через 1,5 минуты (или 1 обьем колонки) после выхода положительных.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI
Странная история.
Сахара анализировали на амино-колонке и никаких проблем не возникало, причем детектор даже не термостатировали.
Здесь на стандартах в мертвом объёме пик отрицательный, при 3 мин - положительный, а при вколе воды картина совсем обратная. На стандартах отрицательные пики идут после 5.5 мин., а на воде их вообще нет.
Возьмите стандарты, воду и ацетонитрил из других источников - посмотрите изменится ли что-то.
С уважением StYV.
Сахара анализировали на амино-колонке и никаких проблем не возникало, причем детектор даже не термостатировали.
Здесь на стандартах в мертвом объёме пик отрицательный, при 3 мин - положительный, а при вколе воды картина совсем обратная. На стандартах отрицательные пики идут после 5.5 мин., а на воде их вообще нет.
Возьмите стандарты, воду и ацетонитрил из других источников - посмотрите изменится ли что-то.
С уважением StYV.
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI
StYV, спасибо Вам за ответ.
Стандарты у меня от разных фирм, все равно негативные пики появляются.
Воду беру из университета (специально купили фильты для деионизатора), а вот ACN... Посмотрим что будет.
Кстати, я через колонну провел воду (0,5 ml/min) и тоже никаких негативных пиков однаруженно не было. Если бы смывалась колонка, то негативыне пики в большей степени появились бы именно там, а так как n(20)D у воды 1,333 а у ACN 1,344 - может все же дело в равновесии? Негатвыных пиков нет даже если убрать колонку и провести подвижную фазу (25:75 H2O:ACN), вводя в бланке воду.
И положительный пик при 3 минутах тоже вызывает недоумение.
Стандарты у меня от разных фирм, все равно негативные пики появляются.
Воду беру из университета (специально купили фильты для деионизатора), а вот ACN... Посмотрим что будет.
Кстати, я через колонну провел воду (0,5 ml/min) и тоже никаких негативных пиков однаруженно не было. Если бы смывалась колонка, то негативыне пики в большей степени появились бы именно там, а так как n(20)D у воды 1,333 а у ACN 1,344 - может все же дело в равновесии? Негатвыных пиков нет даже если убрать колонку и провести подвижную фазу (25:75 H2O:ACN), вводя в бланке воду.
И положительный пик при 3 минутах тоже вызывает недоумение.
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI
Для Вашей колонки и скорости потока подвижной фазы время для мертвого объёма примерно 1.4 мин и пики в этом месте вполне возможны. Но вот пик при 3 мин не понятен, так и далее отрицательные пики. Что-то есть в реактивах или непонятная неисправность прибора. Возможно что-то с инжектором или при вколе.
При уравновешивании колонке видно когда она готова по дрейфу базовой линии. Возьмите покачайте часика 4-5 и потом колите.
Мой совет - позовите опытного хроматографиста, заочно давать советы это никчемное занятие.
С уважением StYV.
При уравновешивании колонке видно когда она готова по дрейфу базовой линии. Возьмите покачайте часика 4-5 и потом колите.
Мой совет - позовите опытного хроматографиста, заочно давать советы это никчемное занятие.
С уважением StYV.
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI
Воду... лучше купите бутылку архыза. AcN любой импортный берете.
Термостат ячейки лучше включить на 30 градусов и часа на два оставить, промывая при этом ячейку сравнения. Ну и колонку желательно термостатировать при тридцаточке.
Еще без колонки инжектор в положении load и inject последовательно промыть AcN и водой (кипяток!) большими обьемами...
Ну и шприц тоже промыть тем же. Думаю все исчезнет после этих танцев))
Термостат ячейки лучше включить на 30 градусов и часа на два оставить, промывая при этом ячейку сравнения. Ну и колонку желательно термостатировать при тридцаточке.
Еще без колонки инжектор в положении load и inject последовательно промыть AcN и водой (кипяток!) большими обьемами...
Ну и шприц тоже промыть тем же. Думаю все исчезнет после этих танцев))
С уважением,
Иван Стыскин
Иван Стыскин
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI
А если в университете стоит Milli-Q в хорошем состоянии или обычный стеклянный бидистиллятор, за которым также ухаживают, по-моему, это будет намного лучше архыза
Главное, какая бы это вода ни была, чтобы она не была столетней давности... Вода для ПФ всегда должна быть свежей, никак иначе...
Главное, какая бы это вода ни была, чтобы она не была столетней давности... Вода для ПФ всегда должна быть свежей, никак иначе...
В некоторые головы мысли приходят умирать...
Здравствуйте, мои любимые, до боли знакомые грабли... Давно я на вас не наступал...
Здравствуйте, мои любимые, до боли знакомые грабли... Давно я на вас не наступал...
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI
Добрый день, товарищи!
Спасибо всем за ответы.
Причина негативных пиков найдена.
Дело в том, что в ячейке образовалось высокое давление из за чего открыт клапан, который открывается только при промывке ячейки сравнения (purge). То есть при низких скоростях (или разделив поток, как мы и сделали) негативных пиков обнаружено не было.
Спасибо всем за ответы.
Причина негативных пиков найдена.
Дело в том, что в ячейке образовалось высокое давление из за чего открыт клапан, который открывается только при промывке ячейки сравнения (purge). То есть при низких скоростях (или разделив поток, как мы и сделали) негативных пиков обнаружено не было.
-
- Сообщения: 1
- Зарегистрирован: Сб мар 04, 2017 9:51 pm
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI)
А что делать, если выходят не только отрицательные пики, но также базовая линия падает, так что похожа на кардиограмму? При этом прибор (хроматограф thermo ultimat 3000) промывался водой и органическими растворителями перед испытанием. Хроматограммы не обсчитываемы вообще.
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI)
Что с давлением происходит во время анализа? Если прыгает - у Вас однозначно воздух в системе. В насосе, точнее. Если давление стабильно, но прыжки все равно есть - тоже может быть воздух, только в ячейке дететкора. Например, если это спектрофотометрический (или DAD). Хроматограмму в студию.
В некоторые головы мысли приходят умирать...
Здравствуйте, мои любимые, до боли знакомые грабли... Давно я на вас не наступал...
Здравствуйте, мои любимые, до боли знакомые грабли... Давно я на вас не наступал...
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI)
Привет коллега!
Одной из причин может быть что изрядно замазан детектор. Вытащить кювету, посмотреть ну и помыть в азотной кислоте или разбавленном хромпике.
И действительно воздух в кювете. На выход капилляр подлиннее - осторожно.
Причин может быть много и давать советы заочно?
С уважением StYV.
Одной из причин может быть что изрядно замазан детектор. Вытащить кювету, посмотреть ну и помыть в азотной кислоте или разбавленном хромпике.
И действительно воздух в кювете. На выход капилляр подлиннее - осторожно.
Причин может быть много и давать советы заочно?
С уважением StYV.
Re: После положительного пика выходят отрицательные (HPLC RI)
День добрый!
Ну, хоть пару вещей из траблшутинга можно проверить (безобидных и простых). Сложные варианты, действительно, заочно не проверить...
Ну, хоть пару вещей из траблшутинга можно проверить (безобидных и простых). Сложные варианты, действительно, заочно не проверить...
В некоторые головы мысли приходят умирать...
Здравствуйте, мои любимые, до боли знакомые грабли... Давно я на вас не наступал...
Здравствуйте, мои любимые, до боли знакомые грабли... Давно я на вас не наступал...
Кто сейчас на конференции
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 6 гостей