Как запустить ВЭЖХ после долгого простоя?

[Phytologist]

Граждане-хроматографисты, нужна ваша помощь!

История:
В лабе, в которой я с некоторых пор работаю, есть машина для высоко-эффективной жидкостной хроматографии (HP 1100 HPLC System). Ей не пользовались в течении последних 5-7 лет. И как свидетельствуют очевидцы, ничего специального не было предпринято после последнего использования - в общем, просто выключили и оставили. А вот мне она нужна очень-очень, в связи с чем возник вопрос о её реанимации.

Вопрос: С чего начать запуск ВЭЖХ, который долго не использовался?
Проблема, которая видна невооружённым глазом - это, то что на некоторых переходниках выступил осадок соли. Это, по-видимому, кислый фосфат калия, склянка с которым подсоединена к насосу. Наверное, он осел не только на переходниках, но и в самой системе. Реально ли его вымыть оттуда? И чем? Деионизированная вода? Слабый раствор серной (или соляной) кислоты?
Почему-то есть ощущение того, что лучше проверять не всю систему разом, а по одному блоку (сначала насос, потом дегазатор, потом пробоотборник, потом блок с колонной, потом флуоресцентный детектор). Это верный подход?

За все замечания и предложения - заранее спасибо!

[Upstream]

Смойте выступившие кристаллы соли снаружи водой из промывалки, аккуратно развинтите все резьбовые соединения и отмойте всё, что отсоединилось от соли дистиллятом. (С нержой - никакой солянки и даже хлоридов!) Затем вооружитесь шприцем на 10-50 мл с водой и подсоедините его на вход насоса любым способом, в зависимости от подручного хламового ассортимента. Простейший вариант - толстостенный силиконовый шланг с узким проходом, кусок которого напяливается на люэровский носик шприца, а другим концом на входной шланг насоса. Промываете вручную оба насоса водой (на выходе только открытый tubing), после чего включаете и качаете воду на стандартной скорости потока минут 5-10. Потом вручную же промываете инжектор во все дыры, в которые будет входить вода и только после этого поворачиваете кран и снова промываете. Если на соединениях детектора тоже были кристаллы, аналогично вручную промываете и его кювету. После этого можете расслабиться и действовать по руководству или дождаться дальнейших указаний наших экспертов.

[Deminolog]

НЕ включать насос и не качать ничего пока что через линии. Берем мануальчик, открываем, читаем... Нужно разобрать все и промыть теплым дистиллятом. Живности в линиях не было? Не цвели? Нужно убедиться в целостности диафрагм насоса, отсутствия задиров на плунжерах, вылизать все линии, смочить, запустить, удалить воздух из системы и проверять дальше на стабильность. В любом случае, первое - устраните последствия от прошлого пользователя.

[Phytologist]

Upstream, Deminolog, благодарю за комментарии/советы.

Простейший вариант - толстостенный силиконовый шланг...

О, да! Шприцов и разнокалиберных шлангов в лабе полно, так что без проблем соорудил промывающее приспособление. Довольно удобно.

отсутствия задиров на плунжерах

Чего, простите, и на чём? Это где?
Живности/цветения в системе не наблюдается.

======================================================================================================

В общем, процесс пошёл, начал я отмывать хроматограф.

Дегазатор. Входы и выходы работают нормально для всех 4 каналов (A,B,C,D). Всё нормально.

Насос. После вдумчивого промывания Multi Channel Gradient Valve заработал. Каналы от Pump head до Damper и обратно, Activ inlet valve и Purge valve работают нормально. Застопорилось всё на Outlet ball valve (на фотке ниже + картинка из мануала). Не проходит вода совсем, даже чуть-чуть. В чём может быть дело? Думал открутить, но не нашёл подходящего ключа, отложил это дело на завтра.

Пишу по-английски, потому что русского мануала нет, а как все эти детали по-русски зовутся я не знаю.

[абр]

[ В чём может быть дело?

Залип тот самый ball в клапане. Раскручивайте и мойте.

[StYV]

А капилляр от клапана отсоединили?
В стакан дист. воду, туда клапан и на ультрасоник, Разбирать сам клапан не надо! Потом можно еще в ацетоне озвучить.
Но вообще печальный признак, возможно придется покупать новый.
С уважением StYV.

[Upstream]

В моей ограниченной практике полной непроходимости клапанов в прямом направлении не встречалось. Либо выходной капилляр зарос, либо предшествующий пользователь на прощание завинтил его перепутав ориентацию. В некоторых конструкциях (Gilson) это возможно. После развинчивания проверьте проходимость клапанного блока в оба конца тем же шприцем с водой и силиконовым намордником.

[Phytologist]

Всем спасибо!

Новости с полей:
Сегодня возился с этим несчастным клапаном.
Открутил его от Pump head, снял plastic cap и gold seal. Начал промывать - ничего не проходит. Положил в DI-воду, 3 подхода по полчаса в ультрасонике. Сейчас всё течёт нормально в одном направлении (см. фото ниже, стрелка вверх) и совсем НЕ течёт в обратном (стрелка вниз).



Это нормально? Его таким сделала природа или с ним что-то не так? Имею в виду, в Pump head всё течёт через этот клапан в Damper и он нужен для того, чтобы ничего не текло обратно? Так? Или нет?

[Phytologist]

И ещё.
Кроме прочего, проверяю проходимость всех капилляров. Практически все - такие, как на фото ниже (различается только длина).





Так вот как-то не особо хорошо через них течёт вода. Я понимаю, что диаметр их составляет 5-ую часть миллиметра и из них не должно хлестать, как из шлангов садовых. Но тем не менее, из них должно всё течь маленькой струйкой или понемногу капать? Насколько часто их нужно менять (если вообще нужно)?

[styskin]

"Его таким сделала природа" и работает он по Вашему описанию правильно. Выходной клапан, с него на демпфер.
В Вашем случае самое главное не убить кювету.
Ну и немного по теории оборудования http://www.chromforum.ru/viewtopic.php?f=49&t=333

[абр]

Но тем не менее, из них должно всё течь маленькой струйкой или понемногу капать?

Вода должна скорее капать. Можете наполнить капилляр водой и положить на часок в УЗ баню. Потом промыть чистой водой, продуть воздухом, наполнить ацетоном и еще минут на 30 в УЗ.
Менять капилляры приходится крайне редко, в основном из-за механического повреждения уплотнительного конуса (течет соединение).

[smihailov]

Вода должна скорее капать.

Дык у него и капает. Вопрос был, что грядки поливать не удобно.

[dan14444]

Чой-та капать... Вполне струячить, если кубик в минуту подать.

[Phytologist]

Всем спасибо за комменты и советы!

В Вашем случае самое главное не убить кювету.

О какой кювете речь?

Ну и немного по теории оборудования http://www.chromforum.ru/viewtopic.php?f=49&t=333

Вот за эту ссылку огромное спасибо, хоть буду знать, чего и как по-русски зовётся!

Вода должна скорее капать.

Я машину ещё не запускал, проверяю проходимость всех капилляров обычным шприцом или пипеткой-дозатором с силиконовым переходником (по совету Upstream). Думаю, это нужно проверять уже насосом, а не просто шприцом. Вот тогда и ясно будет.

======================================================================================================

Сегодня возился с насосом. Проверил проходимость всех каналов и капилляров, собрал, ещё раз проверил. Короче, всё работает, можно запускать.
Есть вопрос. Отсоединить целиком Activ inlet valve от Pump head у меня не получилось (не было ключа с тонкой головкой), поэтому я его отделил лишь частично. Но как говорит мануал, если его отсоединить весь, то можно там найти Valve cartridge.
Вопрос: Что именно делает этот картридж в этом клапане? Насколько часто его надо менять? Как определить то, что пора его заменить? Когда течь начнёт?
Всё, о чём говорю, показано на картинках ниже (первые две - из мануала по насосу, последняя - отсюда).





Вот он этот картридж:

[Phytologist]

Вопрос про картридж inlet-клапана (из прошлого поста) всё ещё актуален, но я продолжу живописать происходящие события.

Сегодня промывал автосэмплер.
К моему большому счастью, всё работает исправно, вода проходит по всем каналам нормально. Так что этот девайс к запуску готов.

Снова есть вопросы.
Кому лениво читать детали, скажу коротко, что меня, в целом, интересует, как работает/движется игла, как устроен Needle seat (место, куда игла втыкается) и почему в систему не попадает воздух при инъекции образца.

Подробнее об этом.
Разбираясь с тем, куда и как идёт поток растворителя через Switching Valve, немного озадачился всем этим делом, а особенно тем, как функционирует игла автосэмплера и то место, куда она втыкается, - соответственно, Needle и Needle seat. Думаю, вы все это прекрасно знаете, но чтоб наглядно было, о чём я спрашиваю, ниже добавлю немного картинок из мануала по автосэмплеру.

Итак, известно, что Switching Valve может принимать два положения, обеспечивая переключение потока элюента через автосэмплер. Большую часть времени (как я понял) растворитель бежит от насоса через Switching Valve, потом через Metering device, потом через иглу в Needle seat, возвращается в Switching Valve и дальше устремляется в колонну. Вот так вот:



Вопрос 1: Игла постоянно погружена в Needle seat, это её обычное положение и выходит она оттуда только для отбора образца? Верно?

Как только запускается процесс инъекции образца, Switching Valve принимает другое положение и элюент бежит прямо из насоса в колонну. Вот так:



Вопрос 2: В этот момент времени на участке, отключенном от потока элюента, поршень заходит в канал Metering device и, если нам нужно для инъекции 20 мкл, погружается он настолько, что из Leak channel вытекает 20 мкл элюента. Это так? Или на этом участке ничего никуда не течёт?

Затем игла выходит из Needle seat и отправляется на поиски виалы с образцом:



Вопрос 3: Поскольку участок "Needle seat - Switching Valve - Leak channel" в данный момент времени представляют собой открытую систему, то всё, что там было, благополучно вытекает в слив? Так? По крайней мере, по принципу сообщающихся сосудов, должно быть так.

После этого Switching Valve переключается в изначальное положение, игла возвращается в Needle seat и делает инъекцию:



Вопрос 4: И если из Needle seat всё вытекло, как я писал выше, то после инъекции в капилляре должен образоваться пузырёк воздуха и помчаться прямиком в колонну. Но ведь этого же не происходит, да? А как тогда устроено это переключение?

Промывая детали автосэмплера обнаружил, что Needle seat ведёт себя немного странно. Вода проходит через неё свободно, а вот если гнать воду в обратном направлении, то идёт она не так легко.



Вопрос 5: В чём может быть дело? Как утроен этот Needle seat? Тоже по принципу клапана, так что не даёт элюенту вытекать из капиляра в то время, когда игла отсутствует?

Много вопросов. Но хороший специалист сможет ответить на них кратко
Повторюсь, в целом, интересует 1) как работает/движется игла, 2) как устроен Needle seat (место, куда игла втыкается) и 3) почему в систему не попадает воздух при инъекции образца.