Бромирование

[Lapitskaya]

День добрый! Помогите, пожалуйста, разобраться.
Готовлю шесть калибровочных стандартов для опрелеления содержания акриламида. Бром получаю: к водному раствору акриламида добавляю KBr и H2SO4. Затем на час в холодильник. Титрую избыток брома тиосульфатом натрия. Далее провожу экстракцию этилацетатом (2 х 10 мл). Сушу. Упариваю. Перерастворяю в этилацетате и в хроматограф. И в результате: несколько калибровочных стандартов вообще выпадают. Иногда хроматограф их не видит вообще.
Еще после тисульфата провожу высаливание сульфатом натрия.
Газовый хроматограф Agilent 7890A
ЭЗД.

[Любитель_Манниха]

Откуда методика?
Сами сочинили?

[Lapitskaya]

Зарубежная методика.
Method 8032A
Acrylamide by gas chromatography
Взята за основу + немного отсебятинки
Странно получается колю 5 мкг/л и 200 мкг/л в итоге второй пик меньше в разы.

[avor]

Че то в публикациях бромную воду из серки и KBr никто не получает. Все отдельно ее добавляют.

например вот цитата из дисера:
https://www.diva-portal.org/smash/get/d ... TEXT01.pdf

the sample.......were derivatized through bromination by using potassium bromide (7.5 g), hydrobromic acid (acidification to pH 1-3), and saturated bromine water (10 ml) according to the method by Castle et al. (Castle, Campos & Gilbert, 1991; Castle, 1993). The sample was kept at 4 °C over-night and the excess bromine decomposed by adding sodium thiosulphate (1 M) drop-wise until theyellow color disappeared. Sodium sulphate (15 g) was dded, and the solution extracted with ethyl acetate: hexane (2×20 mL, 1:4 (v/v)). The two-pooled organic fractions were dried and evaporated on a rotary evaporator to about 200 μL.The analyzed roduct of bromination was 2,3-dibromopropionamide (eq. 1). Br2 + H2C=CH-CONH2→ H2CBr-CHBr-CONH2 eq. ) High concentrations of acid [H+] and bromide [Br-] are required to suppress the loss by dissociation of free elemental bromine, Br2, which is the active agent. The 4 °C over-night long reaction time has its istory in that it was required dueto the internal standard methacrylamide or N,N-dimethylacrylamide, hich were in use before MS-techniques were common (when GC-electron capture (GC-EC) and ther detection techniques were used). These compounds had a lover reaction rate with bromine han acrylamide itself. Today, when GC-MS or GC-MS/MS techniques are available, isotopic ubstituted acrylamide is always recommended. With the use of isotopic substituted acrylamide as the internal standard, the reaction time can be shortened to one or two hours (Nemoto, et al., 2002; Gertz & lostermann, 2002; Ono, et al., 2003; Hamlet, Jayratne & Sadd, 2004). We have however, kept the longer reaction time since in the daily laboratory work with these analyses,

Ну и статейка там тоже бромную воду используют.

[Lapitskaya]

Еще 0.44 мл бромата калия добавляю 0.2 М

[amik]

Возьмите больше бромата. 1 мл раствора, например.
Как видно из опубликованных методик, бром берётся с заведомым избытком.

[vmu]

Упариваю. Перерастворяю в этилацетате и в хроматограф.

Досуха упариваете? Попробуйте упаривать не досуха.

[Lapitskaya]

Почему сульфат натрия не полностью растворяется?
Т.е. образуется пересыщенный раствор?
Я рассчитывала массу сульфата, исходя из его растворимости в воде (19.2 г в 100 г воды при 20 °С)
Может это сера (все-таки тиосульфатом титровала)?

[amik]

Если растворяете безводный Na2SO4, то он возможно просто медленно растворяется из-за образования гидратов. Перемешивайте при растворении полчасика или нагрейте с перемешиванием до 30-35 град., после чего охладите.
Вообще, пожалуйста, подробнее описывайте, что и как делаете - здесь не телепаты собрались. Про тот же бромат чуть не клещами вытягивали информацию, откуда берётся бром для бромирования

[Lapitskaya]

Если осталось немного нерастворимого сульфата, это сильно влияет на экстракцию бромпроизводного акриламида?

[amik]

Если немного, то не сильно.

[Lapitskaya]

А может тогда меньше брать сульфата для высаливания? Пик вылез несимметричный.

[Любитель_Манниха]

Фото пика в студию!
С колонкой всё в порядке?
На более низких концентрациях тоже несимметричный?
Как сушите экстракт?

Так вы методику воспроизводите или зачем-то именно насыщенный раствор Na2SO4 хотите добавлять?

[Lapitskaya]

Акриламид с концентрацией 800 мкг/л
http://savepic.ru/index.php

Конц. 200мкг/л
http://savepic.ru/index.php
Еще один с той же конц.
http://savepic.ru/index.php

Конц. 80 мкг/л
http://savepic.ru/index.php

Колонка была супер грязная. До этого тут в сплите делались пестициды. Кондиционировала. Не сильно помогло. Отрезала примерно 50 см. Легче стало, но не намного. Видно надо испаритель чистить.

Экстракт сушу сульфатом магния (покупной кристаллогидрат прокаливаю, затем перетираю и использую). Когда добавляю в эфирный слой, то сульфат превращается в какую-то кашицу, а импортный - в корку. Может тут проблема?

[Lapitskaya]

Добавление сульфата натрия прописано по методике, для высаливвния, как я понимаю. Но прежде, чем экстрагировать, нужно, чтобы сульфат растворился полностью. А этого не происходит. Его когда насыпаешь, он превращается в такой комок.

[Любитель_Манниха]

Если обезвоженный сульфат магния так расплывается- в этилацетате много воды. Вы сушите не полностью и закалываете влажный экстракт. Ждите расслаивания ЭА слоя при экстракции дольше. Если не поможет - переносите экстракт на свежую порцию осушителя.

С сульфатом натрия - встряхивайте/перемешивайте.

Ссылок на картинки нет, они на главную страницу фотохостинга.

[Lapitskaya]

Конц. 200 мкг/л
http://savepic.ru/12942733.htm

Конц. 80 мкг/л
http://savepic.ru/12926349.htm

Конц. 5 мкг/л
http://savepic.ru/12970380.htm

[Lapitskaya]

Колонка аджилентовская НР5

[Lapitskaya]

Результат ночного кондиционирования
http://savepic.ru/12939660.htm