определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ

физико-химические методы исследования, методики и другие вопросы аналитической химии
analytical chemistry, analysis and techniques for professionals
Ответить
nadezda1989
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Вт июл 11, 2017 6:57 pm

определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ

Сообщение nadezda1989 » Ср ноя 08, 2017 2:27 pm

Подскажите, пожалуйста, как можно доработать методику определения полисорбата-80 в белковом препарате методом ВЭЖХ для получения стабильных результатов? Концентрация в препарате составляет 0,04 мг/мл, определяем без предварительной подготовки на колонке С8, детектирование при 235 нм. Подвижная фаза ацетонитрил:вода 80:20. Результаты не воспроизводимы, плюс очень маленький отклик. Возможно стоит заменить колонку? или начать концентрировать пробу?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10821
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ

Сообщение avor » Ср ноя 08, 2017 7:46 pm

Возможно стоит поменять детектор на рефрактометрический. И как это без подготовки? У вас белок всю колонку засрет, если вы его предварительно из препарата не удалите.

nadezda1989
Сообщения: 10
Зарегистрирован: Вт июл 11, 2017 6:57 pm

Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ

Сообщение nadezda1989 » Пт ноя 10, 2017 3:18 pm

проводили экстракцию хлороформом, меняли колонку и УФ-детектирование на детектор по светорассеянию. Результаты пляшут, извлечение 85-115 %.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10821
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ

Сообщение avor » Сб ноя 11, 2017 7:19 am

Светорассеяние можно смотреть только в водной фазе, если у вас в подвижной фазе спирт или ацетонитрил мицеллы не образуются и светорассеяния - нет, к тому же оно будет работать только, если у вас концентрация аналита будет существенно выше ККМ. Не думаю, что хлороформ хорошее средство для экстракции твина из белка.
Белок надо осаждать ацетоном, а надосадок упаривать в вакууме. Затем растворять в подвижной фазе и гнать в изократике с рефрактометром на детекции

Polychemist
Сообщения: 8908
Зарегистрирован: Вт дек 21, 2004 11:42 am

Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ

Сообщение Polychemist » Сб ноя 11, 2017 4:54 pm

Ну попробуйте на 210, 220 нм.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10821
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ

Сообщение avor » Сб ноя 11, 2017 5:22 pm

Да, работал я с такой фигней типа поглощение 205 - фигня получается, хотя формально какой-то процент поглощения присутствует.

Ответить

Вернуться в «аналитическая химия / analytical chemistry»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 1 гость