определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ
-
- Сообщения: 10
- Зарегистрирован: Вт июл 11, 2017 6:57 pm
определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ
Подскажите, пожалуйста, как можно доработать методику определения полисорбата-80 в белковом препарате методом ВЭЖХ для получения стабильных результатов? Концентрация в препарате составляет 0,04 мг/мл, определяем без предварительной подготовки на колонке С8, детектирование при 235 нм. Подвижная фаза ацетонитрил:вода 80:20. Результаты не воспроизводимы, плюс очень маленький отклик. Возможно стоит заменить колонку? или начать концентрировать пробу?
Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ
Возможно стоит поменять детектор на рефрактометрический. И как это без подготовки? У вас белок всю колонку засрет, если вы его предварительно из препарата не удалите.
-
- Сообщения: 10
- Зарегистрирован: Вт июл 11, 2017 6:57 pm
Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ
проводили экстракцию хлороформом, меняли колонку и УФ-детектирование на детектор по светорассеянию. Результаты пляшут, извлечение 85-115 %.
Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ
Светорассеяние можно смотреть только в водной фазе, если у вас в подвижной фазе спирт или ацетонитрил мицеллы не образуются и светорассеяния - нет, к тому же оно будет работать только, если у вас концентрация аналита будет существенно выше ККМ. Не думаю, что хлороформ хорошее средство для экстракции твина из белка.
Белок надо осаждать ацетоном, а надосадок упаривать в вакууме. Затем растворять в подвижной фазе и гнать в изократике с рефрактометром на детекции
Белок надо осаждать ацетоном, а надосадок упаривать в вакууме. Затем растворять в подвижной фазе и гнать в изократике с рефрактометром на детекции
-
- Сообщения: 9448
- Зарегистрирован: Вт дек 21, 2004 11:42 am
Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ
Ну попробуйте на 210, 220 нм.
Re: определение полисорбата-80 методом ВЭЖХ
Да, работал я с такой фигней типа поглощение 205 - фигня получается, хотя формально какой-то процент поглощения присутствует.
Кто сейчас на конференции
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 19 гостей