Определение S-нитрозотиолов в биологических образцах

физико-химические методы исследования, методики и другие вопросы аналитической химии
analytical chemistry, analysis and techniques for professionals
Ответить
Demiurg
Сообщения: 141
Зарегистрирован: Вт мар 09, 2010 3:33 pm

Определение S-нитрозотиолов в биологических образцах

Сообщение Demiurg » Вт июн 05, 2018 3:16 pm

Здравствуйте уважаемые участники форума!

В результате ознакомления с методикой определения S-нитрозотиолов возникли кое-какие вопросы. Собственно за помощью их разрешить я и обращаюсь к уважаемой общественности.

Методика следующая:
1. образцы (50 мкл) разбавляются равным объёмом воды
2. добавление 50 мкл водного раствора сульфамата аммония (100 мкМ)
3. инкубация 10 мин.
4. добавление 50 мкл реакционной смеси (1 часть 1110 мкМ р-ра сулемы и 4 части 158 мкМ раствора 2,3-диаминонафталина; оба раствора на основе 0,62 М соляной кислоты)
5. инкубация 10 мин.
6. доведение рН до 11,5-12.0 с помощью 1 М NaOH.
7. Измерение флуоресценции

Вопрос:
а сколько щёлочи нужно добавлять для доведения рН до 11,5-12,0?

Объём смеси (на этапах 4-5) составляет 200 мкЛ.
Образцы - это будут плазма и сыворотка крови (человеской, мышиной, крысиной).
Сильно желательно, чтобы итоговый объём (после добавления щёлочи) не превышал 350 мкл (поскольку методику планируется ставить в 96-луночном микропланшете, а там как раз такая максимальная ёмкость лунки). Ну и ещё, вероятно, следует учитывать возможность осаждения белков анализируемых образцов щёлочью (конечная концентрация щёлочи не должна приводить к этому).
Вероятно, эти флуоресцирующие продукты превращения S-нитрозотиолов флуоресцируют в широком (если не во всём) диапазоне рН. Но максимальная интенсивность флуоресценции приходится на 11,5-12,0. Авторы статьи, содержащей описываемую методику, этот момент не проясняют. А проверять экспериментально нет возможности ( в
наличии нет аппаратуры, способной измерять рН в таких микрообъёмах; если она вообще существует). Разве что добавлять какой-нибудь индикатор, селективно меняющий окраску в достаточно узком диапазоне рН (11,5-12,0).
Нельзя ли просто добавлять какой-то фиксированный объём щёлочи для обеспечения рН в указанном диапазоне?

Спасибо!
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Ответить

Вернуться в «аналитическая химия / analytical chemistry»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 1 гость