Окситетрациклин ОФ ВЭЖХ

[Maestro]

Доброго времени суток.
Проблема следующая, при анализе окситетрациклина (вероятно такая же ситуация будет и с другими тетрациклинами) пик вещества не появляется.
Возможно что он взаимодействует с неподвижной фазой, и накапливается в колонке.( Колонка ODS) . Элюент вода/ацетонитрил в разных соотношениях. Также пробовал добавлять метиловый спирт в воду. Ничего путного не вышло.
Возможно кто работал с тетрациклинами или просто в состоянии предположить что надо сделать.

[StYV]

Для начала посмотреть в статьях как люди работали.
С уважением StYV.

[Сержл]

Снять УФ, возможно, смотрите не ту волну. Тетрациклины плохо ходят по силикагелю, думаю, стоит добавить чуть NEt3.

[styskin]

в поиске есть http://www.anchem.ru/forum/read.asp?id=10460

[Maestro]

Для начала посмотреть в статьях как люди работали.
С уважением StYV.

В литературе используется в одном варианте насыщение колонки другими тетрациклинам, а потом анализ. И такое кондиционирвоание колонки каждый день. Мне не нравится этот подход, так как тетрациклин которым насыщают колонку естественно анализировать уже нельзя
В другой используется полимерная колонка. Такой колонки у меня нет.
Другой вопрос что я мог не все статьи посмотреть, если кто видел буду крайне благодарен на 1292552@mail.ru

в поиске есть http://www.anchem.ru/forum/read.asp?id=10460

Спасибо посмотрел. Но там что интересно автор топика так и не написала к чему она пришла. И вышел ли у нее стандарт.

Снять УФ, возможно, смотрите не ту волну. Тетрациклины плохо ходят по силикагелю, думаю, стоит добавить чуть NEt3.

Уф безусловно снял. У него поглощения на 269нм и на 355нм. Есть еще в в районе 200нм но точной цифры не вспомню. Точно проблема не в этом.
А вот что касается плохо движение по силикагелю, думаю, это самое оно. Потому в одной методе они и насыщали его, а в другой вообще полимер.
NEt3 интересная идея, жаль что под рукой нет этого вещества. А так вроде тоже полигидрокси соединение . Наверное сработало бы.

С уважением, Maestro. Вопрос продолжает быть актуальным..........

[Сержл]

Аминогруппы там есть, а они - злейшие враги хождения по силикагелю, амин неплохо помогает. Есть еще угольные колонки, там проблемы не будет, но они дороговаты (метода формирования данного сорбента очень сложная). Можно еще колонки из сверхсшитого полистирола посмотреть, они дешевле. Если есть только силикагельные, то, возможно, поможет элюент с большим количеством метанола, он хорошо гоняет полярные и липучие бяки (самый экстрим - ацетонитрил с метанолом, там ходит все).

[Maestro]

Аминогруппы там есть, а они - злейшие враги хождения по силикагелю, амин неплохо помогает. Есть еще угольные колонки, там проблемы не будет, но они дороговаты (метода формирования данного сорбента очень сложная). Можно еще колонки из сверхсшитого полистирола посмотреть, они дешевле. Если есть только силикагельные, то, возможно, поможет элюент с большим количеством метанола, он хорошо гоняет полярные и липучие бяки (самый экстрим - ацетонитрил с метанолом, там ходит все).

Спасибо дельный совет, про "дружбу" аминогруппы и силикагеля не знал.
Я пробовал метанол, вода (водный раствор метанола 20%), ацетонитрил. Соотношения разные пробовал, ну даже намека не было на пик. Или вы имели ввиду попробовать метанол/ацетонитрил без воды?
А вот что касается полимерной колонки, про нее слышал. Но под рукой нет а заказывать это дело не быстрое
Вчера попробовал Щавелевую кислоту добавить в элюент (10mM Водный р-р) и в соотношение 70% на 30% ацетонитрила вышел пик(да широковат, но лучше чем ничего). Но после щавелевой кислоты около часа надо отмывать колонку ежедневно. И почему она помогла толком сформулировать не могу Да и к тому же она нелетучая, а мне нужен летучий элюент. Может на трифторуксусную или трихлоруксусную заменить, как думаете окажут ли они такое же воздействие как щавелька может дело не только в pH?

[Сержл]

Ацетонитрил с метанолом без воды (оба с высокой элюирующей силой). Окситетрациклин можно назвать кислотой (фенол), более сильная кислота выгоняет (за счет конкуренции) вещество с силикагеля, должна оказать помощь уксусная кислота.

[Maestro]

Попробовал уксусную кислоту(приблизительно 5%) в воду добавить. Пик вышел жаль только широковатый очень даже. Амин попробовать думаю надо,он забьет активные центры силикагеля, все таки думаю OTC из за этой группы не уходит из колонки. Вот щавелевая сильнее уксусной кислоты и пик был при щавельке уже.
Кстати спасибо за помощь. Как прийду к более менее нормальному и стабильному варианту обязательно напишу в топике.

[StYV]

Перейти на С8. Использовать буфер, например, доксорубицин без буфера так там и остается.
С уважением StYV.

[Сержл]

Амин уже не надо, раз кислота выгоняет, с вопросом избыточной фиксации определились. Сила кислоты-добавки особо не играет, она просто должна превосходить по кислотности вещество в пробе. Теперь увеличивайте количество более полярного растворителя в элюенте для дальнейшего обужения. Ширина пика, в том числе, обусловлена диффузией на сорбенте за время длительного анализа. Про стабильный вариант Вы правильно сказали, возможно, прошло полное насыщение сорбента веществом, а последнее уже выходит от равновесия со следующим вколом. Проявляется данное явление несовпадением (сильным) времен удерживания от закола к заколу.
Да, 5% кислоты многовато, колонка может дать дуба. Обычно пользуют до 0,1% добавки (амина или кислоты). Вкол маленький (по к-ву в-ва), кислота (амин) только для равновесия.

[Любитель_Манниха]

Коллега, у вас аналитика, или препаратив? Попробуйте 0.1% TFA в метаноле или ацетонитриле Или буфер формиат аммония/муравьинка.

[StYV]

И все таки сила кислоты важна, во многих старых работах по ВЭЖХ обычно использовали уксусную кислоту. Видимо это связано с тем , что работали не химики. Отличный вариант использовать трифторуксусную кислоту. Например, разделение полиненасыщенных жирных кислот более эффективно, чем с использованием фосфорной кислоты. Правда не все обращенно-фазные сорбенты ее хорошо держат.
С уважением StYV.

[Любитель_Манниха]

Луна и Gemini вполне держат 0.1% TFA. По поводу силы кислоты, действительно, разница есть, я по крайней мере наблюдал, прокалывая один и тот же образец с 0.1% TFA или же 0.1% муравьинки.

[Сержл]

Для кислот - элюирующая способность + сила.

[Aryl]

Аминогруппы там есть, а они - злейшие враги хождения по силикагелю, амин неплохо помогает. Есть еще угольные колонки, там проблемы не будет, но они дороговаты (метода формирования данного сорбента очень сложная). Можно еще колонки из сверхсшитого полистирола посмотреть, они дешевле. Если есть только силикагельные, то, возможно, поможет элюент с большим количеством метанола, он хорошо гоняет полярные и липучие бяки (самый экстрим - ацетонитрил с метанолом, там ходит все).

Спасибо дельный совет, про "дружбу" аминогруппы и силикагеля не знал.
Я пробовал метанол, вода (водный раствор метанола 20%), ацетонитрил. Соотношения разные пробовал, ну даже намека не было на пик. Или вы имели ввиду попробовать метанол/ацетонитрил без воды?
А вот что касается полимерной колонки, про нее слышал. Но под рукой нет а заказывать это дело не быстрое
Вчера попробовал Щавелевую кислоту добавить в элюент (10mM Водный р-р) и в соотношение 70% на 30% ацетонитрила вышел пик(да широковат, но лучше чем ничего). Но после щавелевой кислоты около часа надо отмывать колонку ежедневно. И почему она помогла толком сформулировать не могу Да и к тому же она нелетучая, а мне нужен летучий элюент. Может на трифторуксусную или трихлоруксусную заменить, как думаете окажут ли они такое же воздействие как щавелька может дело не только в pH?

Можно еще использовать фосфорную кислоту ( юзаю раствор рН 2.3). Если я правильно понимаю, в данном случае не последнюю роль играет ионная сила. То применение фосфорной кислоты может помочь.
Так как в сабже есть амино группы, протонирование которых несколько уменьшит гидрофобность субстрата, а для улучшение эфективности разделения можно исплользовать ион парный реагент. (например 0.01 м раствор гептансульфоната натрия).
А вообще не пробовали градаентное элюирование?

[Vanya Ivanov]

Пишите мне в личку: если договоримся о цене - продам свой старый работающий метод анализа тетрациклинов.
Этим методом пользуются с ряд фирм и институтов по стандартизации лек препаратов, для которых я метод разработал.

[Сержл]

Если в Москве, то можем потестить свою сверхсшитую полистирольную колонку... нам для пробы (применимости), Вам для науки