Концентрация буфера

физико-химические методы исследования, методики и другие вопросы аналитической химии
analytical chemistry, analysis and techniques for professionals
Ответить
MumboJumbo
Сообщения: 197
Зарегистрирован: Сб сен 20, 2008 2:21 pm

Концентрация буфера

Сообщение MumboJumbo » Пт окт 28, 2011 6:15 pm

Здравствуйте.
Помогите пожалуйста разобраться. Вот в статьях пишут: "берут 0,1 М ФСБ". Это значит, что взяли концентрации всех солей сложили, вот и получилась цифра 0,1М? Верно ли я рассуждают?

Спасибо

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 11539
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Концентрация буфера

Сообщение avor » Пт окт 28, 2011 7:22 pm

В статьях так не пишут или это ошибка(ссылку дайте на статью или процитируйте буквально в достаточно широком контексте). ФСБ может быть 1х, 5х, 20х, но молярным он не может быть. ФСБ это сложная смесь из разных фосфатов, хлорида калия и натрия. А вот например просто фосфатный буфер может быть 0.1М и 0.01М и 0.3М молярность считатется по фосфату независимо от от того гидро или дигидро, или фосфорная к-та, или просто фосфат считается общая концентрация буфернного вещества. Например в аммиачном буфере общая концентрация ионов ааммония и недиссоциированной фрмы аммиака.

MumboJumbo
Сообщения: 197
Зарегистрирован: Сб сен 20, 2008 2:21 pm

Re: Концентрация буфера

Сообщение MumboJumbo » Пт окт 28, 2011 7:32 pm

Вот к примеру отрывок из статьи, методика проведения ELISA:

Microtiter plates were coated with the coating antigen in coating buffer (0.05 M sodium carbonate buffer, pH 9.6, 200 mL). After overnight incubation at 4 0C, the plates were washed with PBS-Tween (0.007 M PBS, pH 7.6, containing 0.015 M NaCl and 0.05% Tween 20) using an automatic plate washer. Binding sites not occupied by the coating antigen were blocked with blocking buffer (0.08 M PBS, containing 0.15 M NaCl, pH 7.6, and 1% casein, w/v; 300 mL well21) for 1 h at room temperature. Plates were then washed as before. ...

все методику приводить не буду, не об этом речь. Что ФСБ сложная смесь, это понятно, но тут приводится отдельная концетрация хлорида натрия. Для чего приводится - это тоже понятно, в данном случае, это критично. Я так полагал, что PBS, в данном случае, это как раз и есть простой фосфатный буфер, но сейчас я больше запутался)

PS: хотя нет, знаете, лучше приведу полностью:

Microtiter plates were coated with the coating antigen in coating buffer (0.05 M sodium carbonate buffer, pH 9.6, 200 mL). After overnight incubation at 4 0C, the plates were washed with PBS-Tween (0.007 M PBS, pH 7.6, containing 0.015 M NaCl and 0.05% Tween 20) using an automatic plate washer. Binding sites not occupied by the coating antigen were blocked with blocking buffer (0.08 M PBS, containing 0.15 M NaCl, pH 7.6, and 1% casein, w/v; 300 mL well21) for 1 h at room temperature. Plates were then washed as before.
After washing with PBS-Tween, GamIgG-HRP was added (1 : 8000 in 0.08 M PBS; 200 mL well-1) and incubated at room temperature with agitation for 1 h. The plate was washed as before.

В методике для PBS всегда указывается его концентрация, плюс концентрация NaCl. Но в составе буфера для инкубации Ат не указана эта соль. И мне кажется это принципиальным.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 11539
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Концентрация буфера

Сообщение avor » Пт окт 28, 2011 9:28 pm

Безграмотный стьюдент писал методику профессору в статью, а профессор не проверял, ибо глазки замылены, ну и ревьюеры с редакторами ушами прохлопали. В данном случае PBS надо читать(переводить) ФБ. А что соли в коньюгатах не написали, то тоже скорее всего налукавили, хотя и так должны работать. И еще там похоже пропущена важная часть опыта это взаимодействие с мышинной сывороткой или супер(асцит) от моноклонов.

MumboJumbo
Сообщения: 197
Зарегистрирован: Сб сен 20, 2008 2:21 pm

Re: Концентрация буфера

Сообщение MumboJumbo » Сб окт 29, 2011 11:13 am

Вы знаете, я больше встречал статей, где концентрацию PBS указывалась в молях. Хотя сейчас я стал обращать на этот факт, и тоже нашел статьи, где указывали 1х, 5х, 20х... Но это редкий случай. В большинстве протоколов для ELISA пишут мольную концентрацию. Получается, что имеется в виду простой ФБ. Присутствие или отсутствие сильного электролита в буфере, на буферную емкость не влияет, но влияет на ионную силу, которая в свою очередь сказывается на иммунохимических взаимодействиях. Я не очень много проводил ELISA в своей жизни и поэтому обращаю на такие факты. Как Вы знаете, дьявол кроется в деталях.

Ответить

Вернуться в «аналитическая химия / analytical chemistry»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 3 гостя