белок vs щёлочь

вопросы современной биологической химии, молекулярной биологии, химической энзимологии и смежных наук
biochem, molbio, chemical enzymology and related discussions for professionals
Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Ср ноя 13, 2013 11:55 am

Ясно, спасибо :)
Попробую.
Для контроля надо, конечно, что-нибудь с известным содержанием белка.
Аптечный "альбумин человеческий 20%-й раствор" подойдёт? Если подойдёт, то что туда можно добавить
после вскрытия, чтобы жизнь не завелась? Пока нагуглил азид натрия. Фенол законсервирует или высадит?
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Ср ноя 13, 2013 12:49 pm

Да!Пойдет. Просто расфасуйте по ПП пробиркам и заморозьте на -20 и ничего не добавляйте.

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Чт ноя 14, 2013 2:08 am

А вот ещё такой дурацкий вопрос, тут говорилось про гидролизат казеина.
Вот
http://biohold.ru/sgk.win.db
аминного азота 60% от общего, а остально что? :shuffle:
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Чт ноя 14, 2013 7:37 am

как правило, это азот, приходящийся на ди и трипептиды.

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Чт ноя 28, 2013 7:23 pm

Наконец-то выделили некоторые финансы, продолжаю вопросы :)

Первое - какой стандарт выбрать - аптечный альбумин человеческий, или реактивный альбумин бычий?
Последний дешевле, но растворимость в воде меньше (пишут, что 2%).

Вот процедура из оригинальной статьи, стало быть, можно работать по ней, осадив
белки трихлоруксусной кислотой и промыв... чем? Той же ТХУ, более разбавленной?
Желательно ли выпадающий после добавления ТХУ осадок центрифугировать?
10 тыс g мне недоступно...

Код: Выделить всё

Standard BCA reagent and protocol.
Reagent  A  consists  of  an  aqueous  solution  of  1% 
BCA-Na2,  2%  Na2C03  -  HZO,  0.16%  Naz  tartrate,  0.4%  NaOH,  and  0.95%  NaHC03.  If 
needed,  appropriate  addition  of  NaOH  (50%) or  solid  NaHC03  is made  to  reagent  A  to  ad- 
just  the  pH  to  11.25.  Reagent  B consists  of  4% CuS04  - 5H20  in  deionized  water.  Reagents  A 
and  B  are  stable  indefinitely  at  room  temperature  and  are  commercially  available  (Pierce). 
Standard  Working  Reagent  (S-WR)  is  prepared  weekly  or  as  needed  by  mixing  100  vol 
of  Reagent  A  with  2  vol  of  Reagent  B.  S-WR is apple  green  in  color. 
The  standard  assay  procedure  consists  of mixing  1 vol  of  sample  (standard  or  unknown) 
with  20  vol  of  S-WR  in  a  test  tube.  

Color  development  proceeds  immediately,  even  at room  temperature,  but  it  can  be  greatly  ac- 
celerated  by  incubating  the  tubes  in  a constant temperature  water  bath.  In  this  respect,  the 
temperature  chosen  for  the  color  development is  directly  related  to  the  desired  sensitivity.  

After  the  chosen  incubation step,  the  samples  are  cooled  to  room  temperature  and  their  absorbances  measured  at  562 nm  versus  a reagent  blank.  The  concentration of  unknowns  can  be  then  determined  from  a 
plot  of  concentration  vs absorbances  obtained for  the  standard  protein  solutions. 
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Чт ноя 28, 2013 11:19 pm

Можно промыть ацетоном или даже смесью ацетона с серным эфиром. Откручивать обязательно, увы, иначе куча белка останется в супере в виде взвеси. БСА растворяется в воде чуть ли не до 60%, так что этот реактивный гадость какая-то. БСА при 280 нм при концентрации 1г/л дает поглощение на см 0,66 это для того чтобы можно было определить концентрацию в стандарте.

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Пт ноя 29, 2013 9:53 am

Спасибо!
А откручивать обязательно на 10000g?
Три-четыре тыщи - совсем никак?

[ Post made via Android ] Изображение
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Пт ноя 29, 2013 10:20 am

ну хотя бы на 5000 минут 30 на 3000 4000 нужно дооолго крутить час полтора.

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Пт ноя 29, 2013 11:08 am

avor писал(а): БСА растворяется в воде чуть ли не до 60%, так что этот реактивный гадость какая-то.
Я смотрел вот это:

Код: Выделить всё

http://www.dia-m.ru/reactive.php?productid=16043
По CAS-номеру вон буржуи пишут - растворимость 10 мг/мл.

Код: Выделить всё

http://www.millipore.com/catalogue/item/126609-5gm
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Пт ноя 29, 2013 4:28 pm

Не хороший этот альбумин у диаМ как стандарт для градуировки я думаю он валиден, а вообще нехороший 100пудово китайзкого происхождению.

А про растворимость это они врут эта надпись всего лишь означает, что указанную величину они гарантируют и не более того он в крови содержится в концентрации 30-60мг/мл.
Посмотрите здесь. Здесь альбумин получше
http://www.almalab.ru/price/price.xls

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Пт ноя 29, 2013 7:40 pm

Хм. Там он по цене зато похуже, чем аптечный человеческий 20%-й раствор :)
Правда в аптечном, судя по инструкциям, доступным в инете, ещё ацетилтриптофан содержится до кучи :?
А в сухом виде белок для таких целей тоже лучше в морозилке хранить?
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Пт ноя 29, 2013 9:18 pm

Можно просто в холодной камере +4-+10 градусов

Аватара пользователя
dan14444
Сообщения: 2541
Зарегистрирован: Ср окт 10, 2007 2:14 am

Re: белок vs щёлочь

Сообщение dan14444 » Вт дек 03, 2013 2:33 pm

Тэкс, мухи и котлеты... В этой смесюге могут плавать АК, всевозможные пептиды и, возможно, остатки белков. Мелкие пептиды от АК осаждением ТФУ не отделить, это не белки.

Первое что стоит сделать - понять, а сколько там вообще амидов. Т.е. тупо сравнить первичный азот до и после полного гидролиза.

Если амидо много - понять, что интересует - лёгкие пептиды, тяжёлые, собсно белки... и от этого уже подбирать анализ.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Вт дек 03, 2013 3:07 pm

dan14444 писал(а): Т.е. тупо сравнить первичный азот до и после полного гидролиза.
Гыыы!! Ну, дык, об этом уже писал avor в этой ветке. Ажно в Вс ноя 10, 2013 10:24 am
avor писал(а):В таком раскладе просто измеряйте первичноаминный азот нингидрином до гидролиза и после и уже будет показательно по части глубины прохождения гидролиза, в отичии от общего азота.

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Пн дек 09, 2013 7:16 pm

А хим.энциклопедия врёт, что нингидрин с пептидным азотом тоже реагирует? :shuffle:
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Пн дек 09, 2013 9:10 pm

Не знаю не пробовал, но даже если взаимодействует цвет должен быть другим.

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Чт мар 20, 2014 4:42 pm

Коллеги, киньте пожалуйста ссылку на метод Руэмана, или методику, что-то кроме "комплекса Руэмана" ничего не гуглицо :shuffle:
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 12650
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение avor » Пт мар 21, 2014 4:52 am

Это вообще о чем метод? И как фамилие на латинице пишется?

Joni-Fantazi
Сообщения: 260
Зарегистрирован: Пт май 08, 2009 10:40 am

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Joni-Fantazi » Пт мар 21, 2014 12:41 pm

Это с помощью нингидрина, как я понял. http://www.anchem.ru/FORUM/read.asp?id=3933

Аватара пользователя
Любитель_Манниха
флудомастер
Сообщения: 15138
Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm

Re: белок vs щёлочь

Сообщение Любитель_Манниха » Пт мар 21, 2014 5:02 pm

Сам не знаю, но пара коллег, видимо, знают :)
viewtopic.php?p=424545#p424545
viewtopic.php?p=757663#p757663
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская

Ответить

Вернуться в «биохимия и молекулярная биология / biochemistry and molecular biology»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 20 гостей