белок vs щёлочь
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
Ясно, спасибо
Попробую.
Для контроля надо, конечно, что-нибудь с известным содержанием белка.
Аптечный "альбумин человеческий 20%-й раствор" подойдёт? Если подойдёт, то что туда можно добавить
после вскрытия, чтобы жизнь не завелась? Пока нагуглил азид натрия. Фенол законсервирует или высадит?
Попробую.
Для контроля надо, конечно, что-нибудь с известным содержанием белка.
Аптечный "альбумин человеческий 20%-й раствор" подойдёт? Если подойдёт, то что туда можно добавить
после вскрытия, чтобы жизнь не завелась? Пока нагуглил азид натрия. Фенол законсервирует или высадит?
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
Да!Пойдет. Просто расфасуйте по ПП пробиркам и заморозьте на -20 и ничего не добавляйте.
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
А вот ещё такой дурацкий вопрос, тут говорилось про гидролизат казеина.
Вот
http://biohold.ru/sgk.win.db
аминного азота 60% от общего, а остально что?
Вот
http://biohold.ru/sgk.win.db
аминного азота 60% от общего, а остально что?
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
как правило, это азот, приходящийся на ди и трипептиды.
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
Наконец-то выделили некоторые финансы, продолжаю вопросы
Первое - какой стандарт выбрать - аптечный альбумин человеческий, или реактивный альбумин бычий?
Последний дешевле, но растворимость в воде меньше (пишут, что 2%).
Вот процедура из оригинальной статьи, стало быть, можно работать по ней, осадив
белки трихлоруксусной кислотой и промыв... чем? Той же ТХУ, более разбавленной?
Желательно ли выпадающий после добавления ТХУ осадок центрифугировать?
10 тыс g мне недоступно...
Первое - какой стандарт выбрать - аптечный альбумин человеческий, или реактивный альбумин бычий?
Последний дешевле, но растворимость в воде меньше (пишут, что 2%).
Вот процедура из оригинальной статьи, стало быть, можно работать по ней, осадив
белки трихлоруксусной кислотой и промыв... чем? Той же ТХУ, более разбавленной?
Желательно ли выпадающий после добавления ТХУ осадок центрифугировать?
10 тыс g мне недоступно...
Код: Выделить всё
Standard BCA reagent and protocol.
Reagent A consists of an aqueous solution of 1%
BCA-Na2, 2% Na2C03 - HZO, 0.16% Naz tartrate, 0.4% NaOH, and 0.95% NaHC03. If
needed, appropriate addition of NaOH (50%) or solid NaHC03 is made to reagent A to ad-
just the pH to 11.25. Reagent B consists of 4% CuS04 - 5H20 in deionized water. Reagents A
and B are stable indefinitely at room temperature and are commercially available (Pierce).
Standard Working Reagent (S-WR) is prepared weekly or as needed by mixing 100 vol
of Reagent A with 2 vol of Reagent B. S-WR is apple green in color.
The standard assay procedure consists of mixing 1 vol of sample (standard or unknown)
with 20 vol of S-WR in a test tube.
Color development proceeds immediately, even at room temperature, but it can be greatly ac-
celerated by incubating the tubes in a constant temperature water bath. In this respect, the
temperature chosen for the color development is directly related to the desired sensitivity.
After the chosen incubation step, the samples are cooled to room temperature and their absorbances measured at 562 nm versus a reagent blank. The concentration of unknowns can be then determined from a
plot of concentration vs absorbances obtained for the standard protein solutions.
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
Можно промыть ацетоном или даже смесью ацетона с серным эфиром. Откручивать обязательно, увы, иначе куча белка останется в супере в виде взвеси. БСА растворяется в воде чуть ли не до 60%, так что этот реактивный гадость какая-то. БСА при 280 нм при концентрации 1г/л дает поглощение на см 0,66 это для того чтобы можно было определить концентрацию в стандарте.
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
Спасибо!
А откручивать обязательно на 10000g?
Три-четыре тыщи - совсем никак?
[ Post made via Android ]
А откручивать обязательно на 10000g?
Три-четыре тыщи - совсем никак?
[ Post made via Android ]
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
ну хотя бы на 5000 минут 30 на 3000 4000 нужно дооолго крутить час полтора.
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
Я смотрел вот это:avor писал(а): БСА растворяется в воде чуть ли не до 60%, так что этот реактивный гадость какая-то.
Код: Выделить всё
http://www.dia-m.ru/reactive.php?productid=16043
Код: Выделить всё
http://www.millipore.com/catalogue/item/126609-5gm
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
Не хороший этот альбумин у диаМ как стандарт для градуировки я думаю он валиден, а вообще нехороший 100пудово китайзкого происхождению.
А про растворимость это они врут эта надпись всего лишь означает, что указанную величину они гарантируют и не более того он в крови содержится в концентрации 30-60мг/мл.
Посмотрите здесь. Здесь альбумин получше
http://www.almalab.ru/price/price.xls
А про растворимость это они врут эта надпись всего лишь означает, что указанную величину они гарантируют и не более того он в крови содержится в концентрации 30-60мг/мл.
Посмотрите здесь. Здесь альбумин получше
http://www.almalab.ru/price/price.xls
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
Хм. Там он по цене зато похуже, чем аптечный человеческий 20%-й раствор
Правда в аптечном, судя по инструкциям, доступным в инете, ещё ацетилтриптофан содержится до кучи
А в сухом виде белок для таких целей тоже лучше в морозилке хранить?
Правда в аптечном, судя по инструкциям, доступным в инете, ещё ацетилтриптофан содержится до кучи
А в сухом виде белок для таких целей тоже лучше в морозилке хранить?
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
Можно просто в холодной камере +4-+10 градусов
Re: белок vs щёлочь
Тэкс, мухи и котлеты... В этой смесюге могут плавать АК, всевозможные пептиды и, возможно, остатки белков. Мелкие пептиды от АК осаждением ТФУ не отделить, это не белки.
Первое что стоит сделать - понять, а сколько там вообще амидов. Т.е. тупо сравнить первичный азот до и после полного гидролиза.
Если амидо много - понять, что интересует - лёгкие пептиды, тяжёлые, собсно белки... и от этого уже подбирать анализ.
Первое что стоит сделать - понять, а сколько там вообще амидов. Т.е. тупо сравнить первичный азот до и после полного гидролиза.
Если амидо много - понять, что интересует - лёгкие пептиды, тяжёлые, собсно белки... и от этого уже подбирать анализ.
Re: белок vs щёлочь
Гыыы!! Ну, дык, об этом уже писал avor в этой ветке. Ажно в Вс ноя 10, 2013 10:24 amdan14444 писал(а): Т.е. тупо сравнить первичный азот до и после полного гидролиза.
avor писал(а):В таком раскладе просто измеряйте первичноаминный азот нингидрином до гидролиза и после и уже будет показательно по части глубины прохождения гидролиза, в отичии от общего азота.
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
А хим.энциклопедия врёт, что нингидрин с пептидным азотом тоже реагирует?
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
Не знаю не пробовал, но даже если взаимодействует цвет должен быть другим.
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
Коллеги, киньте пожалуйста ссылку на метод Руэмана, или методику, что-то кроме "комплекса Руэмана" ничего не гуглицо
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Re: белок vs щёлочь
Это вообще о чем метод? И как фамилие на латинице пишется?
-
- Сообщения: 260
- Зарегистрирован: Пт май 08, 2009 10:40 am
Re: белок vs щёлочь
Это с помощью нингидрина, как я понял. http://www.anchem.ru/FORUM/read.asp?id=3933
- Любитель_Манниха
- флудомастер
- Сообщения: 15138
- Зарегистрирован: Вт июл 15, 2008 11:55 pm
Re: белок vs щёлочь
Сам не знаю, но пара коллег, видимо, знают
viewtopic.php?p=424545#p424545
viewtopic.php?p=757663#p757663
viewtopic.php?p=424545#p424545
viewtopic.php?p=757663#p757663
Я лично правами человека накушалась досыта. Некогда и мы,и ЦРУ,и США использовали эту идею как таран для уничтожения коммунистического режима и развала СССР. Эта идея отслужила свое,и хватит врать про права человека и про правозащитников. © Новодворская
Кто сейчас на конференции
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 20 гостей