Активность Н+-АТФазы

[АннаАнна]

Уважаемые специалисты, обращаюсь с просьбой: надо разобраться с расчетом активности Н+-АТФазы.
Я - не очень умный аспирант лаборатории экспериментальной фармакологии. Эксперимент проведён по методике, взятой из учебного пособия "Биоэнергетика клетки. Химия патологических процессов" под редакцией В.Ю.Сереброва, Г.А.Сухановой, с. 25-26, 81-82. При расчетах сразу возник вопрос - как пересчитать 1 г навески ткани на 1 л раствора. Может быть кто-то владеет этой методикой? Прошу совета. Заранее спасибо

[avor]

Вот цитаты из протокола:
"К осадку
митохондрий добавляют 0,5-1,0 мл трис-HCl буфера и ресуспенди-
руют осадок для получения рабочей суспензии органелл, который ис-
пользуют для определения активности Н+АТФ-азы. Рабочая суспен-
зия хранится на льду. В суспензии определяют концентрацию белка
биуретовым реактивом."

"Активность
Н+АТФ-азы выражают в мкмоль неорганического фосфата/мин на 1
мг белка".

Где вы здесь видите л растворов и г ткани.

[АннаАнна]

Спасибо за ответ. Если нетрудно - посмотрите, пожалуйста, в том же пособии определение концентрации неорганического фосфата методом Кондрашовой. Без него активность фермента не вычисляется, в предложенной формуле есть составляющяя В, о которой я и спросила

[avor]

Аннушка! Ну нельзя же настолько отключать мозг. И отдавать прерогативу думать господам Кондрашовой, Сереброву и Сухановой. Вам же не нужна концентрация фосфора в ткани, вам нужна даже не концентрация, а его количество. Поэтому строите градуировку по стандарту и все. Забудьте вообще об этой формуле.

[АннаАнна]

"Градуировку по стандарту" - а ссылку поконкретнее? Для примера набросайте расчёт при данных: экстинкция в пробе с накопившимся за период инкубации фосфатом - 0.250, исходная экстинкция пробы - 0.029.

[avor]

Аня! Делаете ряд растворов фосфата(ну например натрия) с известной концентрацией. Далее делаете по протоколу все манипуляции и измеряете полученную экстинцию далее на миллиметровке или в экселе строите график в координатах концентрация(или количество) фосфата -- экстинция. ВСЕ! Дальше находите на графике и отмечаете точку с экстинцией, полученной в эксперименте и находите какой концентрации фосфата она соответствует. Если график представляет прямую линию из начала коордиат, то можно написать формулу типа С=а*Е Коэффициент "а" находится из графика а= (С2-С1)/(Е2-Е1), где С2,Е2 и С1,Е1 координаты любых двух точек на графике. Вы что никогда градуировочных графиков не строили?