Фильтрование растворов белков

[Spiel]

Хотелось бы узнать, через какие фильтры можно экстрагировать белки (осажденный белок должен быть в фильтрате). Бумажные фильтры видимо никакие не подходят? Что самое простое можно сделать "на коленке"?
Очистка белка растительного сырья от липидов и остатков шелухи.

[avor]

МНННННЭЭЭЭ. Экстрагировать через фильтры???? Это как???!!!! Экстракция это перенос в жидкую фазу из твердой или жидкой!!!!
--осажденный белок должен быть в фильтрате
???? Фильтрат это обычно гомогенная прозрачная жидкость. Осажденный - это обычно осадок - твердая фаза.
--Бумажные фильтры видимо никакие не подходят? Что самое простое можно сделать "на коленке"?
Очистка белка растительного сырья от липидов и остатков шелухи.

Почему бумага не подходит?!
Липиды это,типа жир в молоке. Вы случайно не знаете как отделяют жир от молока?

[Spiel]

Да...

(осажденный белок должен быть в фильтрате).

Впоследствии осажденный.
Раствор с растворенным белком пропускается через (бумажный) фильтр (точнее исходное сырье подвергается обработке растворителем белка: на фильтре остатки на выброс, в фильтрате белок)

[avor]

А что вы потом с этим белком собираетесь делать. Просто осаждать(Чем кстати?) Как собираетесь образовавшийся осадок отделять? Куда потом этот осадок использоваться будет. Если просто фильтровать, то я в свое время белковые экстракты фильтровал через ватку. Гомогенаты грубые вообще на мельничных ситах сначала фильтруют с ячейкой 43-75мкм.

[Spiel]

Да пока степень чистоты прикинуть. осаждать раствором хлорида или сульфата натрия. Так через обычный бумажный фильтр экстрагированный из исходной смеси в растворенном виде белок проходит?

[ Post made via Android ]

[avor]

Редкий белок высаливается хлоридом натрия.

Белок, находящийся в истинном растворе, несомненно сквозь бумажный фильтр со свистом пролетает (если ,конечно, его концентрация достаточно высокая, в противном случае возможна неспецифическая сорбция на фильтре. Целлюлозные фильтры одни из тех, что обладают весьма низкой неспецифической сорбцией по отношению к белку). Задержать его может только ультрафильтрационная мембрана. Но вы должны понимать, что первичный гомогенат содержит уйму не растворенных частиц, если это растения, то здесь присутствует и клетчатка и не растворимые структурные белки и белки, выпавшие в осадок при гомогенизации(вся эта дикая не растворимая смесь часто называется - дебрис). Если первичный гомогенат набросить на бумажный фильтр он как правило очень быстро его забивает и фильтрация превращается в муки адские, даже под вакуумом. Так что все еще зависит от предварительных операций, проделанных с первичным гомогенатом до фильтрации на бумажном фильтре. Вторая сторона этого вопроса - это частицы не задерживаемые бумажным фильтром. Даже самый тонкий бумажный фильтр очень плохо задерживает частицы микронного и меньшего размера. Потом эти частицы могут сыграть с экспериментатором злую шутку. Если они попадут в хроматографическую колонку, они забьют колонку. Если вы будете делать осадки из такой, смеси эти частицы будут загрязнять осадок.

[Vanya Ivanov]

Фракционирование белков фильтрацией имеет множество тонкостей и зависит от факторов, которые узучает коллоидная химия (раздел стабильность золей и гелей), а так же разделы химии белка. Сепарация: центрифугирование, фильтрация (тупиковая, тангенциальная, гельфильтрация и тп)

Бумажные фильтры (фильтровальная бумага) подойдут для большинства белков, дающих растворы (микромицеллы) в воде. Через бумажные фильтры не стоит фильтровать: лектины, фибрилярные белки (ну только SDS р-ры подойдут), липофильные белки и ферменты разрушающие целлюлозу.
Чтобы снизить потери лабораторного времени и активности белка - подберите правильное соотношение: площади тупикового фильтра к количеству осадка, ионную силу, рН и температуру р-ра (слишком охлаждать р-ры иногда не выгодно).
Однако .... если перерабатываются осадки из р-ров свыше 25 - 50 л и ниже 20-25 мл то лучше выбрать сепарацию центрифугированием.
Ну а если позволяют финансы то можною завести установку для фильрации в тангенциальном потоке через полисульфоновую или полиамидную мембраны. Полисульфон - живет дольше, а полиамид меньше разрушает белок - выход по активности выше. Это решает множество проблемм...

На начальных стадиях (объемы не большие до 3-5л) разработок технологий очистки геноинженерных белков (гамма-интерферонов) или сывороточных белков (гамма-глобулинов, альбуминов и тп) - после центрифугирования спокойно фильтровали через бумажные фильтры и р-р шел на гельфильрацию или ионообмен ....

[Spiel]

Полисульфон - живет дольше, а полиамид меньше разрушает белок - выход по активности выше. Это решает множество проблемм...

Неужели фильтр может разрушать какие-то белки?.. Спасибо, есть над чем подумать... У меня пока задача попроще - разделить дебрис, чтобы клетчатка не мешалась, и чтобы можно было жиры нормально отделить.
Интересно, продаются какие-то единичные (для ручного режима) лабораторные сита (чтобы недорого, как тут например http://granat-e.ru/catalog_pmzp.html), в т.ч. частным образом

[avor]

-Неужели фильтр может разрушать какие-то белки?.
Фильтр белки может а) сорбировать б) денатурировать при десорбции. Ну фигурально выражаясь "убивает"
--Интересно, продаются какие-то единичные (для ручного режима) лабораторные сита (чтобы недорого, как тут например http://granat-e.ru/catalog_pmzp.html), в т.ч. частным образом
Дешtво такие вещи в лабораторию не продаются, вот рулонам на мельничный комбинат для грохота, плз

Купите тканевое сито для просеивания муки самое мелкое. Так же годятся женские колготки, и марля сложенная в несколько раз. Проще надо быть.

[Polychemist]

Я как-то не заметил - какие объёмы надо чистить? И какого размера частицы удалять? Если речь о десятках-сотнях мл, то чистая вата, забитая в пипеточный носик не спасёт? А ещё есть одноразовые шприцевые фильтры, самые ходовые - 200 или 400 нм, порядка 100 р/шт. Истинный раствор белка через них пройдёт, но если в растворе много чего ещё, есть смысл сначала прогнать через ватку/колготки, чтобы сразу не забить фильтр. А ещё можно разориться на разборную шприцевую насадку для фильтров, сами фильтры продаются, бывают вроде и на 10 микрон. Также бывают разборные воронки для вакуумного фильтрования с фильтрами разной пористости, в т.ч. и на десятки микрон. Эту технику знают и любят гидробиологи, они так отделяют мелких тварей от крупных.

[avor]

Ой! Фильтры 0.2-0,45 мкм для концентрированных растворов белков - это для сильных духом и богатых, Долго! фильтр забивается через каждые 50мл, в лучшем случае! По опыту морская вода(типа зачерпнутая ведром начинает забивать такой фильтр через 250мл, А предварительно отфильтрованная на вате и бумажном фильтре через 750мл. Сыворотка крови(концентрация белка в районе 5-10%) забивает такой фильтр через 20-50мл

Судя по описанию товарища речь идет о первичном экстракте после гомогенизации и объемах от полулитра до 5л. Ну, короче колготки ватка и тп для первичной фильтрации, без сомнения. И центрифуга 5000-10000g - люблю.

[Polychemist]

Ага, центрифуга - это хорошо. На 25000g много чего уходит. На 50000 - ещё больше. Но:

Да пока степень чистоты прикинуть. осаждать раствором хлорида или сульфата натрия. ...

Т.е. если даже той чачи бочка, но надо по-быстрому прикинуть именно растворимую фракцию, то почему бы не взять в ближайшей лавке фильтр (1 шт), в аптеке - шприц (1 шт), прогнать 20-30 мл через ватку, потом через фильтр 0.2-0.45 (сильно не давить! А то мембрана прорвётся....), ну мл 10 пройдёт, для всяких там форезов и не знаю чего ещё хватит. Ну а что делать с бочкой - следующий вопрос. Мне кажется, тут ещё проблема в том, что если надо действительно растворимую фракцию, то сейчас проще фильтровать - будет чёткое понимание, что в фильтрате нет всяких там гидрогелей и прочей ерунды, для отделения которой режим фугования ещё подбирать придётся.
Но, у меня такое ощущение, что мы говорим друг с другом, и возможно не о том, что надо ТС. Хотелось бы чёткого понимания: сколько раствора надо очистить? Какого максимального размера частицы допустимы в продукте?

[avor]

Ну автору по моему и так все ясно. Он промто хотел узнать не импортит ли ему картину бумажные и тому подобные фильтры. А картриджи с луеровским входом только в крупных центрах в лавке можно купить. И то не всегда ест свободный не зарезервированный склад

[Polychemist]

Автор, кажется, из города, существенно крупнее моего... У себя я знаю несколько мест, где есть те насадки...