плазмиды

вопросы современной биологической химии, молекулярной биологии, химической энзимологии и смежных наук
biochem, molbio, chemical enzymology and related discussions for professionals
Ответить
Hydrogenium
Сообщения: 7
Зарегистрирован: Сб апр 28, 2007 4:02 pm

плазмиды

Сообщение Hydrogenium » Пт июн 01, 2007 7:45 pm

можно провести такой опыт?Если нарезать ДНК человека рестриктазой,добавить всё это в плазмиду и встроить эту плазмиду(множество) в любой живой организм.Будет вырабатываться человеческий белок и как это повлияет на
этот организм?

Аватара пользователя
ИСН
Робин Гуд
Сообщения: 8430
Зарегистрирован: Пт окт 10, 2003 5:32 pm
Контактная информация:

Сообщение ИСН » Пт июн 01, 2007 8:13 pm

Ну, будет. А смысл.

Cherep
Сообщения: 22274
Зарегистрирован: Чт окт 30, 2003 9:22 am

Сообщение Cherep » Пт июн 01, 2007 8:30 pm

Примерно так, например, инсулин производят.

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 9410
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: плазмиды

Сообщение avor » Пт июн 01, 2007 9:45 pm

Hydrogenium писал(а):можно провести такой опыт?Если нарезать ДНК человека рестриктазой,добавить всё это в плазмиду и встроить эту плазмиду(множество) в любой живой организм.Будет вырабатываться человеческий белок и как это повлияет на
этот организм?
--можно провести такой опыт?
Можно! Это вообще-то называется "создание геномной библитеки" и является рутинной операцией на сегодняшний день.

--в любой живой организм.
Ну в любой добавить не удасться, обычно это либо кишечная палка, либо дрожжи, либо культура клеток грызуна. Замечу, что подсадка чужего гена в целый организм млекопитающего освоена, в основном, у грызунов(трансгенные животные) и хотя это рутинная операция, но пока очень дорогая. Это связано с тем, что ген вводят в одну единственную клетку(зиготу) будущего организма. Естественно, что выход выживших организмов после таких манипуляций очень не высокий.

---Будет вырабатываться человеческий белок и как это повлияет на
этот организм?

Только при определенных условиях.

1) Человеческий ген из геномной ДНК не получится, тк гены эукариот мозаичны и содержат интроны. Для получения цельного гена используют не геномные библиотеки, а библиотеки так называемых кДНК. Это ДНК полученная из общей информационной( или мРНК) организма, путем ее ревертирования обратной транскриптазой в ДНК. В этом случае для получения гена используется не мозаичная ДНК, а уже процессированная РНК, из которой вырезаны все интроны, и которая служит матрицей для синтеза белка.

2) Обычно плазмида(часто это может быть фаг или вирус), в которую встраивают ген, называется вектором. Так вот, если вектор не содержит генных регуляторных участков адекватных экспрессионым машинам организма встраивания, никакой транскрипции гена происходить не будет. Для этого в вектор перед геном встраивается так называемый промотор - специфичная последовательность ДНК являющаяся регуляторным элементом какого-нибудь гена организма мишени, например промотор какого-нибудь фермента или структурного белка.

3) Организм, в который вводится конструкция должен содержать адекватную шаперонную машину, которая позволяет синтезированной аминокислотной цепи эффективно принимать правильную биологически активную конформацию. У бактерий нет такой машины для эукариотичечких белков. Поэтому эукариотические белки с длинными АК цепями более 100-200 АК , как правило не могут принять в бактериях правильную конформацию. В результате они остаются в денатурированном виде, очень часто выпадают в осадок, образуя в организме реципиенте так называемые "тельца включения" и в конечном счете наносят вред организму-реципиенту. Но уже в дрожжах эта проблема практически отпадает.

-И как это повлияет на
этот организм?

Ну это же зависит от того, что будет экспрессироваться и как этот белок будет взаимодействовать с другими жизненно важными ситемами организма.

Например, вроде как, введение мышам гена зеленого флуоресцентного белка медузы ни к каким катастрофам не привело.

Мечта медицинской генетики была компенсировать негативные мутации введением в организм генов экспроессирующих нормальные немутированные белки. Проблема уперлась в созданее эффективных и безопасных векторов для введения генов.

С другой стороны введение мутантных генов наоборот может вызвать нарушения систем гомеостаза в организме и вызвать его гибель.

Часто для нежизнеспособных трансгенныех животных получают сркещенных с нормальными животными потомков(гибрид F1), так что бы введенный ген оказался рецесивным в этом случае животное выживает, но его потомки полученые от скрещевания c таким же гибридом уже согласно Менделю, могут быть нежизнеспособными.

Справка: Эукариоты это организмы, клетки которых содержат ядро, в которм сосредоточен весь геном организма, при чем геном состоит из нескольких молекул ДНК, называемых хромосомами. Прокариоты (бактерии входят в их число) ядра не имееют, их геном, как правило, состоит из одной молекулы ДНК.

Ответить

Вернуться в «биохимия и молекулярная биология / biochemistry and molecular biology»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 5 гостей