Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину

вопросы современной биологической химии, молекулярной биологии, химической энзимологии и смежных наук
biochem, molbio, chemical enzymology and related discussions for professionals
Ответить
ddd32
Сообщения: 24
Зарегистрирован: Ср окт 25, 2017 5:47 pm

Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину

Сообщение ddd32 » Сб дек 02, 2017 6:31 am

Нашел методику по присоединению 5(6)-FAM к глюкозе (глюкозамину):

Растворяли 5(6)-FAM в 0,1 М 2- (морфолино) этансульфоновой кислоты с 0,5 М хлоридом натрия (рН 6,0) Сшивающий агент 1-этил-3- (3-диметиламинопропил) карбодиимид и организующий связь компонент N-гидроксисукцинимид взвешивали в стеклянном флаконе и красителе медленно добавляли раствор Реакционные компоненты вихревые и реагируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Сшивающий агент инактивировали добавлением 2-меркаптоэтанола. Глюкозамин (15 мг) растворяли в 0,1 М бикарбоната натрия (рН 8,3) Реакционный раствор красителя медленно добавляли, в то время как раствор-реципиент непрерывно мешали. Реакционную смесь инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре при непрерывном перемешивании. Реакцию останавливали добавлением 1,5 М гидроксиламина (рН 8,5) к смеси и инкубировали в течение 1 часа при 25 ° С.

Пойдет ли данная реакция?
Чем можно заменить токсичный меркаптоэтанол?

Аватара пользователя
avor
Сообщения: 10893
Зарегистрирован: Пн янв 24, 2005 1:13 pm

Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину

Сообщение avor » Сб дек 02, 2017 9:39 am

Дурной перевод с английского. Лучше приводить оригинал.
А почему не пойдет? Какие у вас сомнения?
А вас не смущает токсичность гидроксиламина? Да,и карбодимид далеко не поваренная соль.
Вы ищите MES, а тем не менее EDAC более дорогой и не менее , а может быть более редкий реагент.
Гидроксисукцинимидные эфиры FAM вполне доступный коммерчески в России продукт можно не заниматься его изготовлением, а купить готовый. И тогда нужен только глюкозамин. Гидроксиламин тоже можно заменить например этаноламином. Но на самом деле можно просто взять избыток глюкозамина.

ddd32
Сообщения: 24
Зарегистрирован: Ср окт 25, 2017 5:47 pm

Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину

Сообщение ddd32 » Сб дек 02, 2017 1:13 pm

EDAC я уже заказал.
Гидроксисукцинидные эфиры очень дороги, поскольку флуресцентное соединение глюкозамина будет использоваться как компонент для питательной среды для растений, поэтому миллиграммы это мало, необходимы граммы хотя бы 1-2.
По гидроксиламину спасибо.
И по тиоглиголю я его так-то тоже заказал, но что то учитывая что я не собираюсь очищать результат, не уверен я в его безопастности имеется ввиду конечного результата :(
Просто насколько он нужен мне тяжело оценить, поскольку эти реактивы мне малознакомы.

ddd32
Сообщения: 24
Зарегистрирован: Ср окт 25, 2017 5:47 pm

Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину

Сообщение ddd32 » Сб дек 02, 2017 6:06 pm

Тем более я так понимаю меркаптоэтанол нужен для связывания EDAC, но EDAC я так понимаю взаимодействует только с карбонильной группой, и с глюкозамином ему не с чем реагировать, поэтому он наверное указан для общей реакции карбоксифлуоресцеина с аминными группами разных соединений, и поэтому они связывают остатки EDAC

Аватара пользователя
Semenych
Сообщения: 530
Зарегистрирован: Вс июн 06, 2010 7:04 pm

Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину

Сообщение Semenych » Чт дек 07, 2017 3:52 pm

Думаю можно и без дорогого EDAC.
Сначала сварить отдельно гидроксисукцинимидный эфир карбоксифлуоресценина,
например с TFAOSu в пиридине, выделить его, перекристаллизовать.
А далее скрещивать с чем надо, в смеси бикарбоната с чем то типа ТГФа (если акт эфир в нем растворим).
Только желательно взять избыток, 15-20% от теории, того чего не жалко, но лучше глюкозамина.
Мониторить исчезновение эфира по ТСХ.
По окончании реакции реакц массу подкислить и отгонять орг растворитель на роторе.
В идеале продукт должен выпасть, а избыток глюкозамина остаться в растворе.
Ищите и обрящите.

Ответить

Вернуться в «биохимия и молекулярная биология / biochemistry and molecular biology»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 6 гостей