Нужны молярные коэффициенты экстинкции? Где найти?

[Demiurg]

Здравствуйте уважаемые участники форума!

Просьба к Вам помочь мне найти (узнать) молярные коэффициенты поглощения (экстинкции) для следующих веществ в водных растворах и при рН 7.0.:

гуанин (на длине волны поглощения 246 нм)
гипоксантин (на 250 нм)
аденин (на 261 нм)
ксантин (на 276 нм)

Длины волн поглощения должны быть не обязательно точно такие, но близкие к указанным (хотя указанные длины волн, вероятно, соответствуют максимумам поглощения для данных веществ), но коэффициенты экстинкции нужны именно для воды (для других сред не подойдут). Можно, конечно, их определить экспериментально, но нет в наличии данных веществ для приготовления растворов...
Нужно определять концентрацию некоторых пуринов (гуанин, гипоксантин, аденин, ксантин, мочевая кислота) в биообразцах (в частности, в сыворотке крови), вот коэффициенты и понадобились. Но самостоятельно пока нашёл только для мочевой кислоты...

[Любитель_Манниха]

Это вы сами придумали такие вещества в биообразцах на UV-vis определять, или есть работающая методика?

[Polychemist]

Ну например тут:
https://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q= ... r-KBjeNyXQ

И присоединяюся к предыдущему оратору в сомнениях... По-моему, тут надо HPLC.

[Demiurg]

Да ну, что Вы! Я такое придумывать не в состоянии, только чужую дурость повторять (если, конечно, это дурость; может быть, методика реально работает?). Ноги растут отсюда: Проблемы репродукции, т.14, номер 6, 2008 г. с. 74-80. См. сканы этой статьи, в общем.
Я решил "усовершенствовать" данную методику (в смысле более вменяемо выразить результаты, а не просто в единицах оптического поглощения - длина оптического пути известна, оптическое поглощение можно измерить, молярные коэффициенты данных аналитов тоже известны (наверное? я, собственно, самостоятельно их не нашёл), можно и концентрацию в молях вычислить).
ВЭЖХ - это, конечно, хорошо! Но хочется чего-нибудь попроще))
Меня самого смущает корректность определение этих пуринов по поглощению в УФ в силу того, что уж очень близко (особенно в случае гуанина и гипоксантина) лежат опорные длины волн поглощения. Наверняка есть перекрытие...

[Polychemist]

По мне так это адский мрак. Хвосты (и не только хвосты...) от всех полос явно должны накладываться на соседние пики. В сыворотке крови явно есть ещё чему поглощать в этой области. И даже если бы не было чему, то анализ смеси чистых оснований предполагал бы решение некоей системы уравнений, учитывающей экстинкции всех компонентов при всех длинах волн, чего нет в статье.
P.S. Что характерно, для целей статьи ЭТО может и работает, т.е. корреляция чего-то там у беременных с поглощением при этих длинах волн вполне может быть. Но концентрации так определять не надо...

[chaus]

Ну, декомпозицию спектра никто не отменял, выделить полосы поглощения можно, достоверность определения их положения и интенсивности очень сильно зависит от погрешности определения опорных точек спектрограммы.

А что касается определения концентрации по оптической плотности полос, то здесь никто не придумал ничего лучшего, чем готовить калибровочные растворы известных концентраций в соответствующем буфере (для азотистых оснований спектр будет, видимо, сильно гулять от рН) и строить калибровочные графики для каждого соединения. Возможность их определения при совместном присутствии в смеси -- сама по себе серьёзная задачка по аналитике.

[Polychemist]

Возможность их определения при совместном присутствии в смеси -- сама по себе серьёзная задачка по аналитике.

Да не, это довольно простая арифметика (ну алгебра...). И, конечно, надо начать со спектров стандартов на своём приборе. Но вот если максимумы полос отличаются на несколько нм, то веры этому результату не будет. Но это всё ерунда. Они снимают спектр сыворотки крови. И что, в ней на 260-270 больше ничего не поглощает?

[chaus]

Возможность их определения при совместном присутствии в смеси -- сама по себе серьёзная задачка по аналитике.

Да не, это довольно простая арифметика (ну алгебра...). И, конечно, надо начать со спектров стандартов на своём приборе. Но вот если максимумы полос отличаются на несколько нм, то веры этому результату не будет. Но это всё ерунда. Они снимают спектр сыворотки крови. И что, в ней на 260-270 больше ничего не поглощает?

Так я ровно то же самое и написал: математика (т.е. декомпозиция спектра) там простая и есть стандартные проги, а вот как оно пойдёт в конкретной смеси с мешающими примесями -- большой вопрос.

[avor]

Так на всякий случай

ксантин.jpg

гуанин.jpg

гипоксантин.jpg

аденин.jpg

1ый столбец - рН, Второй - длина волны максимума поглощения, третий молярная-экстинция.

Данные взяты из Справочника биохимика под редакцией Доусона(должен быть в сети), там же есть ссылки на первоисточники.