Определение молярной массы

[Vetal]

Здраствуйте.
Не подскажите способа, как можно определить молярную массу в-ва (напр. белка). Только желательно не через осмотическое давление, криоскопические или эбулиоскопические константы.

[eukar]

Для белков перечисленные способы как раз практически неприменимы по причине высокой молекулярной массы. А эбулиоскопия еще и в силу природы белка.
Для белков есть неплохие методы, основанные на гель-хроматографии. Еще масс-спектроскопия - последнее время очень модно. Или нужно все же не для белка?

[Vetal]

Нужно для белка, и нужно только в теории, так что и эбулиоскопическая подошла бы (хотя это немного глупо)....

[eukar]

Здесь рекомендую посмотреть:

http://www.chemport.ru/index.php?id=1552

[AlexM]

В книжке Ленинджера "Биохимия" (1974) по поводу определения молекулярных масс белков есть целый раздел. Кратко: 1) На основании химического состава - если имеются простетические группы (напр., миоглобин). 2) Седиментационный анализ (методы скорости седиментации, седиментационного равновесия, приближения к седиментационному равновесию). 3) Центрифугирование в градиенте плотности 4)Светорассеяние.

[eukar]

Насколько мне помнится (могу ошибаться), методы светорассеяния и седиментации чувствительны не только к массе, но и конформации белка. Поправьте, если не прав.

[Vetal]

А есть ли теоретический способ, легче чем измерение осмотического давления?

[AlexM]

eukar, метод седиментационного равновесия к конформации нечувствителен, но занимает много времени. Для остальных седиментационных методов конформация вносит заметную ошибку только когда форма сильно отклоняется от сферической. Что касается светорассеяния, литература утверждает, что с его помощью можно определять форму и молекулярную массу одновременно, причем очень быстро. К сожалению, я не биохимик, так что собственным опытом поделиться не могу.

[Polychemist]

В краях, где живет eukar, был (есть?) агрегат малоуглового лазерного светорассеяния+ГПХ, можно было принести р-р полимера, измерить инкремент показателя приломления, и агрегат выдавал мол. массу. Природа полимера и конформация вроде как роли не играли. Или это работало только для водорастворимых синт. полимеров, имеющих конформацию набухшего клубка?

А биологи любят электрофорез, кажется с SDS, дабы зарядить все белки одинаково. Может и не SDS, но тут есть кому меня поправить.

[avor]

А биологи любят электрофорез, кажется с SDS, дабы зарядить все белки одинаково. Может и не SDS, но тут есть кому меня поправить.

Любят! Это один из способов. 1) Очень много белков отсквенированно по программе геном человека. Тогда известна их АК-последовательность. Сумма масс всех звеньев даст массу белка это практически аналогично использованию таблицы М.м для расчета по формуле.
2)Способ близкий седиментационному и электрофорезному часто употребимый и в полимерной химии - Гель-фильтрационная, она же ситовая, она же эксклюзионная хроматография. 3) седиментация 4) ЭФ по Лэмли с SDS(додецил(лаурил) сульфат натрия) 5) Масс-спек есть два варианта МALDI и наноспрей. Сейчас наиболее употребимы ЭФ Гель-фильтрация и Масс-спек.
Можно еще упомянуть измерение скорости диффузии и измерение вязкости, но это более но эти методы совсем редки и еще более специфичны.

[eukar]

Да, про применимость методов светорассеяния и седиментации к глобулярным белкам сообразил, но поздно - от компьютера уже ушел. Вязкость как раз для глобулярных белков не работает. SDS, насколько я помню - это не для заряжения, а для разворачивания цепочки (или разворачивают как раз мочевиной?) - тогда как раз конформации становятся близкими и можно говорить об измерении массы.

Но если нужен именно теоретический способ - чем плох масс?

[Dimpler]

SDS, насколько я помню - это не для заряжения, а для разворачивания цепочки (или разворачивают как раз мочевиной?)

SDS здесь и для разворачивания белка, и для того, чтобы у всех белков был одинаковый заряд. Так что мочевину тут использовать не надо.