Классическая Флэш-хроматография.

[suprachemister]

подскажите, что делать если вещество закристаллизовалось (выпало в осадок) прямо в колонке с силикагелем при попытке его почистить на flash? градиент уже повышал до максимума. наносил его уже посаженным на силикагель (dry loading)
и как этого можно избежать в будущем? кто как с этим борется?

[Phobos]

По идее, сухое нанесение должно было помочь. Если все равно плохо, что вещество закристаллизовалось и не двигается, надо менять элюэнт. Добавить ДХМ, например. Что у Вас за вещество, в чем оно растворимо и в каком составе Вы собрались его выгонять?

[SkydiVAR]

Из моего опыта - если нет возможности сменить элюент - только увеличивать объём силикагеля. Пропорционально - и объём колонки, и объём, на который сажаете. Градиент тут ни при чём.
Разумная альтернатива - поиграть со смесями растворителей (заменить эфир на ДХМ и/или этилацетат на хлороформ+метанол или обратно) - таким образом, чтобы полярность осталась прежней, а растворимость вещества в элюенте возросла. Этот метод требует времени на подбор условий для первого разделения, зато для аналогов своего препарата Вы будете уже знать в чём и как хроматографировать.
Я в разных случаях пользовался обоими подходами.

[suprachemister]

Что у Вас за вещество, в чем оно растворимо и в каком составе Вы собрались его выгонять?

вещество довольно полярное, тока немного дубовое в плане растворимости. возможно можно было обойтись обычной перекристализацией из ДМФА, но там примеси такие же дубовые и плохорастворимые, я побоялся
система DCM:MeOH 9:1-->DCM:MeOH:HCOOH 8:2:0.1

Из моего опыта - если нет возможности сменить элюент - только увеличивать объём силикагеля. Пропорционально - и объём колонки, и объём, на который сажаете.

Здравая идея. Увеличиваем растворимость вещества на силикагеле)) хотя колонка была и так огромных размеров, повысило давление на насосе и чуть не разорвало стеклянную колонку)

[Phobos]

То есть оно нерастворимо в чистом ДХМ, а в спиртах растворяется? Если да, попробуйте уменьшить количество ДХМ, а вместо метанола взять этанол или ИПС. Сперва проверьте по ТСХ, что удается подобрать ту же полярность. Ацетон еще можно.

[suprachemister]

То есть оно нерастворимо в чистом ДХМ, а в спиртах растворяется?

растворяеться в смесях ДХМ-MeOH +ацетон(немного). знаю что, у смесей ДХМ-MeOH выше полярность, чем у компонентов взятых по отдельности

а вместо метанола взять этанол или ИПС

метанол более полярный чем этанол и ИПС, соответственно в нем растворимость полярного вещества должна быть выше. ацетон в колонке никогда не пробовал, не знаю как он себя поведет там

[Helлен]

Я бы не стала смывать ацетоном. Конечно можно повышать градиент, но , если сабж не валится в метаноле, то смойте все им или спиртом и снова на колонку.
Зы: поиграйтесь с системами, может вам тройные подойдут ( как у биохимиков) с добавлением водного аммиака или кислоты (в зависимости от структуры)

[ Post made via iPhone ]

[suprachemister]

поиграйтесь с системами, может вам тройные подойдут ( как у биохимиков)

тройные системы это самое оно) я тоже вот думаю градиент кислоты увеличить в своей системе. хоть воду туда добавляй))

[Виктория Сергеевна]

Какую замечательную тему подняли !
У меня как раз тоже несколько вопросов имеется, в частности по колонкам BÜCHI Labortechnik, для MPLC.

[Jokermaniak]

Меня одного напрягло, что они на видео засыпают в колонку сухую силику, а потом давят туда элюент?

Вообще, от такого колонки иногда лопаются. Точно не знаю, почему - то ли распирает набухающим силикагелем, то ли экзотермическая сорбция дает кавитацию - но пару раз видел разорванные таким образом колонки...

to suprachemister: А у Вас примеси-то вышли? Если так, то просто собираете верхний слой силики и смываете вещество на Шотте, или даже с помощью Сокслета, чем-нибудь ядреным. Может, даже ДМСО. Я когда с фталоцианинатами работал, так и делал - брал Шотт с силикой, наносил круд, прогонял разными растворителями, потом снимал верхний слой и смывал с него вещество (sic!) концовой сернягой.

Ещё у нас был опыт работы с элюентами вида ДХМ-метанол-формик. И было замечено, что если все компоненты смеси сухие, хроматография идет лучше. А если смесь мокрая, вещества часто выпадали на колонке...

[suprachemister]

to suprachemister: А у Вас примеси-то вышли? Если так, то просто собираете верхний слой силики и смываете вещество на Шотте, или даже с помощью Сокслета, чем-нибудь ядреным. Может, даже ДМСО. Я когда с фталоцианинатами работал, так и делал - брал Шотт с силикой, наносил круд, прогонял разными растворителями, потом снимал верхний слой и смывал с него вещество (sic!) концовой сернягой.

часть примесей сидит на старте (там исходник в реакции тоже дубовый-он то и сидит на старте).
хотя делать миниколонку с силикагелем на Шотте это тоже идея, вдруг ее пройдет и не застрянет, а если и застрянет, то легче будет потом его оттуда доставать))

а как от ДМСО избавляться то потом после смывания с Шотта? 200 мл ДМСО, например, так просто не упаришь и не лиофилизируешь .
концентрированной сернягой-это вообще жесть (хотя для фталоцианинатов по-видимому работает), она вдруг еще и ценный продукт просульфирует) да и как от нее потом избавиться...

[Jokermaniak]

200 мл ДМСО, например, так просто не упаришь и не лиофилизируешь.

Ну, ДМСО - это от отчаяния. Обычно по нарастающей: ДХМ-ацетон-спирт-ацетонитрил-нитробензол-ДМФ-ДМСО.

Но на крайний случай, упарить ДМСО - не штука, и на роторе можно. Или в воду вылить. Ну, если вещество нельзя греть и мочить - тогда хуже. Но можно в высоком вакууме утянуть ДМСО в ловушку с азотом, а потом затереть остаток с кефиром...

Довелось мне как-то видеть замечательную картину - лардж-скейл препТСХ. Ребята взяли кусок стекла метр на два, нанесли на него слой силикагеля, нанесли на старт линией грамм этак 10 вещества, и элюировали. Элюировали, кстати, хитро - положили под старт полоску ткани по всей длине старта, а конец свесили в элюент. И нормально, кстати, поделилось

концентрированной сернягой-это вообще жесть

А что Вы скажете, если я поведаю, что фталоцианинат меди я перекристаллизовывал из горячей (около 90 С) концовой серняги Перекристаллизовался, чистенький и красивый. Могу продать, кстати, у меня его ещё баночка лежит - всё не могу придумать, что же с ним делать. Волшебный синий цвет невероятной ядрености и полная нерастворимость в органике (ну, кроме кипящих ксилолов или нитробензола) гарантирую!

[Rancid]

ТГФ творит чудеса
(beware of BHT- use HPLC grade)

[Jokermaniak]

ТГФ творит чудеса
(beware of BHT- use HPLC grade)

Ну прям чудеса...

[Helлен]

ТГФные колонки тоже делала. И с добавлением аммиака водного. Все зависит от сабжа.
На Шотте часто чистила, в том числе и большие количества, но тут я поняла, что имеется ввиду флэш под давлением.
ДМСО не стала бы брать, ДМФА всяко лучше и легче упаривать.
И то и другое можно упаривать на масляниках, но с ДМФ всяко приятней работать.

[ Post made via iPhone ]

[S324]

уксус спасет отца

[SIG]

У ДМФА есть неприятная особенность - в нем часто бывают амины, и это не очень хорошо. А упарить можно и на роторе, на обычном водоструе, но греть довольно сильно (90 С).

[Helлен]

Соглашусь про амины в ДМФ. Просто я сравнивала удобство его и ДМСО.
А так спирт, кислота ( или аммиак) наше псе.

[ Post made via iPhone ]

[SIG]

Мы в свое время так накушались побочных диметиламидов, что вынуждены были перейти на ДМСО. Правда не в хроматографии, а в реакциях. А вообще смеси с кислотами или щелочами для хроматографии в неравновесных условиях - нафиг-нафиг. Я помню, что в одном случае Rf на ТСХ менялся от 0 до 1 в зависимости, насколько свежий был хлороформ.

[StYV]

В специально очищенном ДМФА уже через несколько часов появляется диметиламин (анализ ГЖХ).
С уважением StYV.