).Как народ набивает колонку, мокрым или сухим способом и как лучше? Кто как от пузырьков воздуха избавляется и надо ли? Дегазируете ли Вы элюент перед процедурой. Эти вопросы хотелось бы также услышать озвученными.
Классическая Флэш-хроматография.
Все это хорошо, оборудование вижу у всех разное. Однако вот другие есть вопросы. Если, допустим, я по ТСХ подобрал систему для элюента, но на колонке использую силикагель 60-100 (чтобы не давить). Явно эффективность разделения будет несколько другая. Как мне прикинуть параметры колонки? Можно конечно по объему силикагеля приходящегося на 1 гр делимой смеси. Кстати сколько оптимально брать силикагеля на грамм и как это будет зависеть от диаметра частиц силикагеля? Кто и как ориентируется, или это только опыт (который сын ошибок трудных и гений парадоксов друг ).
Как народ набивает колонку, мокрым или сухим способом и как лучше? Кто как от пузырьков воздуха избавляется и надо ли? Дегазируете ли Вы элюент перед процедурой. Эти вопросы хотелось бы также услышать озвученными.
).Как народ набивает колонку, мокрым или сухим способом и как лучше? Кто как от пузырьков воздуха избавляется и надо ли? Дегазируете ли Вы элюент перед процедурой. Эти вопросы хотелось бы также услышать озвученными.
А что значит мокрым и сухим? Я набиваю как в статье Стилла (ну, которая в обменнике). Тобишь насыпал примерно 16 см силикагеля по высоте. Потом утромбовал (постучал колонкой с открытым краном по корковой пробке), потом налил сверху растворитель и надавил. Постепенно воздух вытесняется и довольно быстро.FOX-7 писал(а): Как народ набивает колонку, мокрым или сухим способом и как лучше?
Это наверное сухой способ в твоей терминологии?
Есть ещё когда суспензию силикагеля в растворителе льют в колонку. Я так не делаю.
Да, см выше.FOX-7 писал(а): Кто как от пузырьков воздуха избавляется и надо ли?
Нет.FOX-7 писал(а): Дегазируете ли Вы элюент перед процедурой.
мне больше всего нравится "мокрый" способ. заливается элюент на 1/2 высоты колонки, к нему заливается slurry силикагеля (который в свою очередь получается добавлением маленьких порций силикагеля к элюенту, что позволяет добиться очень высокой однородности без сгустков - самое главное преимущество "мокрого" метода). остальное см. выше.
Plus ça change, plus c'est la même chose
Я сейчас делаю только по-сухому. Засыпаю силикагель, заливаю элюент и давлю пока не выйдет весь воздух. Занимает все это по крайности 10 минут. С мокрым способом у меня выходит намного больше возни. Тут правда надо заметить, что силикагель, что у меня сейчас прекрасно пакуется всухую. Растворители идут в дело прямо из бутылки/бочки. А сколько брать силикагеля - опытом.
Мне вроде как говорили, что при набитии колонны сухим способом, элюэент лучше в колонну запускать снизу.....Cherep писал(а):Я набиваю как в статье Стилла (ну, которая в обменнике). Тобишь насыпал примерно 16 см силикагеля по высоте. Потом утромбовал (постучал колонкой с открытым краном по корковой пробке), потом налил сверху растворитель и надавил. Постепенно воздух вытесняется и довольно быстро.
А зачем отстаиватса? Мы (заполняем только по мокрому) наливаем суспензию и сразу даем ей стечь, потом утрамбовываем, или налив ее, просто спускаем элюэент под давлением, тогда колонна сразу сама и утрамбовываетса...Sig писал(а):Мне больше нравится мокрый способ - суспензию силикагеля в элюенте размешивают до однородности, выливают за один прием в колонку и дают отстояться. затем сливают через кран избыток элюента. При некоторой ловкости можно получить столбик высотой до 50 см без пузырьков.
Я, кажется, особый извращенец среди всех. Я сперва заливаю растворитель, затем через широкую воронку по порциям добавляю силику. Силика тогда равномерно намокает и оседает вниз равномерным слоем. Можно насыпать точно до желаемого уровня, пузырьков воздуха не остается совсем.
Wodka trinkt man pur und kalt, das macht hundert Jahre alt!
-
Алексей Хрущёв
- Сообщения: 284
- Зарегистрирован: Чт окт 06, 2005 5:21 pm
Я делил зищищенные пептиды, на 50мг смеси использовал 10 - 15 г силикагеля 40/100, но Rf сильно различался...FOX-7 писал(а): Кстати сколько оптимально брать силикагеля на грамм и как это будет зависеть от диаметра частиц силикагеля? Дегазируете ли Вы элюент перед процедурой.
С дегазацией приходилось возиться когда работал на HPLC в градиенте вода->ацетонитрил. Скажу сразу, если нет второго насоса дело это гиблое, дегазация под вакуумом не помогает.
Ну как сказать. Если примесь одна и бежит быстро, при этом целевое соединение сидит на силике в малополярных эл-ах, а потом легко смывается более полярным элюентом, то нет проблем. Кстати, наоборот тоже можно. Собственно, я всегда думал, что это и есть флэш хроматография, никакие колонки при этом не нужны, можно вакуумом.SIG писал(а):Не пытайтесь поделить 200 г вещества на 500 г силикагеля, и будет вам щастье
-
Константин_Б
- Сообщения: 2623
- Зарегистрирован: Ср мар 22, 2006 11:51 am
Так и есть! Флэш - это игра с большим колличеством вещества по отношению к массе силикагеля, и вариациями с полярностью эллюента.FOX-7 писал(а):Ну как сказать. Если примесь одна и бежит быстро, при этом целевое соединение сидит на силике в малополярных эл-ах, а потом легко смывается более полярным элюентом, то нет проблем. Кстати, наоборот тоже можно. Собственно, я всегда думал, что это и есть флэш хроматография, никакие колонки при этом не нужны, можно вакуумом.SIG писал(а):Не пытайтесь поделить 200 г вещества на 500 г силикагеля, и будет вам щастье
Вероятно in это сокращение от inch. Один инч равен росту Дюймовочки, или же 2,54 смRa писал(а):В статье J. Org. Chem., Vol. 43, No. 14, 1978 длину колонки обозначают в in. Что это за единица измерения?
Почему всегда берут смесь этилацетата с гексаном, а не с петролейкой (70-100), ведь в последнем случае полярность системы мало изменяется при многократном использовании?
.
Кто сейчас на конференции
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 6 гостей