Классическая Флэш-хроматография.

[Cherep]

в первоисточнике от Стилла было написано про высоту силикагеля - она стандартно 5.5-6 дюймов, а от величины нагрузки и delta Rf зависел только диаметр колонки - таблица в статье Стилла тоже была и она присутсвует в "зелёном практикуме Шарпа"

[RadEl]

в первоисточнике от Стилла было написано про высоту силикагеля - она стандартно 5.5-6 дюймов, а от величины нагрузки и delta Rf зависел только диаметр колонки - таблица в статье Стилла тоже была и она присутсвует в "зелёном практикуме Шарпа"

нашел!!! ура!!! да это действительно Шарп!!!!

[Cherep]

Есть у меня некое вещество - достаточно липофильная карбоновая кислота, имеется амидный атом азота и голый по азоту индол. Вернее, предположительно оно там есть - бо продукт реакции и там есть ещё примеси. Подобрали пару систем, в которых пятна на ТСХ расходятся и самое жирное из них имеет R_f около 0.3 - как учил атец Стилл.
Системы следующие
CHCl₃ \ MeOH 9 : 1 (в этой немного хвостит)
PhH \ MeOH 5 : 1
Силикагель в колонку загружается "по-мокрому" - то есть отмачивается (точнее, дегазирования) в системе, содержащей даже несколько меньше мИтОнола (15 : 1 и 6 : 1 соотвествено) и выливания суспензии в колонку.
Затем, после выдавливания избытка растворителя, наносится смесь и элюируется.

Суть проблемы в том, что вся смесь выходит сразу после "мертвого объема" - нихрена не адсорбируется.

Я предположил было, что метанол адсорбируется на силикагель, забивая все центры сорбции (если такое вообще бывает). Поэтому смесь этих кислот не адсорбируется и проходит вместе с мёртвым объемом.

Взял пластинку ТСХ, прогнал вхолостую. Полностью не высушивая, спустя примерно минуту после полного элюирования и вытаскивания из стакана с элюентом, нанёс вещество и прогнал второй раз. Значения R_f не изменились. То есть, возможно, моё предположение озвученное в предидущем абзаце не верно. Я понимаю, что и силикагели разные, да и колонка не сохнет, в отличие от пластинки. Хотя иногда я наблюдал изменения значений R_f при таком двойном прогоне.

Где ж я тогда прокалываюсь?

[VOVAN CIR]

Много раз так было что по пластинке все хорошо, а из колонки каша.
1) очень крупная силика.
2) митанол может сыроват

Что если заменить на ацытон или ИПС

[SIG]

Тут еще может рН влиять - помню с кислотами была полная засада - когда хлороформ кислый, все вылетает с фронтом. На пластинке бы я попробовал прибавить следы амина или аммиака, но вот можно ли такое сделать на колонке - не уверен, лучше не буду советовать.

[Cherep]

1) очень крупная силика.
2) митанол может сыроват

1) да то что Стилл рекомендует 40-63 микрон
2) с бензолом же смешалось

ИПС с бензолом попробуем, с хлороформом уже этанол сильно даёт "хвостатость"

[Cherep]

pH - да... но хлороформ свежий, стабилизированный этанолом... кислотность вроде меряли (химед-синтез).

кстати, родственный вопрос.
Я подумывал уже было о ступенчатом градиенте.
Примерно как чувак пишет тут http://www.physicsforums.com/archive/index.php/t-43467.html (предпоследний пост)
А кто-нибудь делал такой ступенчатый градиент элюентом, содержащим спирты?
Просто боюсь спирт будет садится на силикагель...

[Любитель_Манниха]

А почему бы не попробовать таки нанести всухую?
Если хлороформ продажный, всякий может быть, я недавно взял химмедовский абсолютировать - судя по тому, как слипался p2o5, воды там нехило А перед этим я в несушёном хлороформе ставил ацилирование УА, прошло процентов на 50

[гаер*]

Не надо индол всухую - на силикагеле окисление ускоряется.

Можно попробовать без метанола, взять вместо него ацетон, который осч недорогой. Полярность до нужной догнать можно будет, с фронтом точно не выскочит, но хвостить может.

[geo]

Тоже допущу, что в системе многовато воды, а вот из элюента или сорбента - не знаю. Если есть другая порция силики, попробуйте на ней. А также, с другим элюентом. Чтобы после мертвого и сразу все кучей... Кстати, можно и хлористый метилен попробовать вместо хлороформа, он не очень сильно отличается, однако может быть и почище и посуше. А что особенного в градиенте на спиртах? Делал не раз, чаще бинарной смесью эац\этанол. В качестве оснОвного привеска добавляю триэтиламин.

[Любитель_Манниха]

Не надо индол всухую - на силикагеле окисление ускоряется.

Я о том, что колонку набить всухую, нанести из пипетки раствор смеси, помыть неполярным р-лем, и запускать градиент

PS: а не тут ли писали, что метанол с силикагеля какую-то белую гадость смывает? или я путаю с оксидом алюминия?
UPD: viewtopic.php?f=9&t=51614

[Cherep]

смывает, но в большой концентрации если

[Phobos]

Я вообще силику сперва сыплю в колонку в гексан, даю слою уплотниться, наношу вещество, потом только начинаю повышать полярность. Ну, в Вашем случае можно начать со смеси ДХМ-гексан ~1:1, но в любом случае для набивки колонны надо использовать элюэнт, в котором вещество не движется вообще. Никакого метанола.

[StYV]

Еще на заре использования ВЭЖХ для силикагеля рекомендовали системы с изопропанолом (были такие статьи - сейчас конечно не упомню), в других как правило результаты не стабильны - зависит от содержания воды в растворителях. В частности, для регенерации колонок рекомендовали пропускать подвижную фазу, содержащую диметоксипропан. В Вашем случае скорее всего в системе много воды. А силикагель на пластинках и для флэш примерно один и тот же, только размерами частиц различается.
С уважением StYV.

[Cherep]

В частности, для регенерации колонок рекомендовали пропускать подвижную фазу, содержащую диметоксипропан. В Вашем случае скорее всего в системе много воды.

Спасибо
Я вчера листал одну книженцию, там была процедура с диметоксипропаном, ДХМ и уксяхой.
Силикагель вобщем-то в той банке действительно старый, банка мерковская, киллограмовая, гвадратная такая в сечении, пластмассовая. И хотя явно гермитизация не видна, один уважаемый человек, говорит, что всё герметично.

Так что проще, прокалить тот силикагель градусах при 100 какое-то время и зафундырить на колонку.
Либо мыть каждую делёжку раствором диметоксипропана, а потом отмываться от уксуса?

[geo]

Оставьте силику на ночь в сушиле при 125 Ц слоем потоньше (в кювете нерж. или эмалированной). Будет активность почти 0. Всегда так делаю, результаты - стабильные. Гель еще чешский, лет 30 ему...

[Cherep]

спасибо, попробуем!

[StYV]

Уксусную кислоту в подвижную фазу добавляют чтобы задавить карбоксильную группу (чтобы не было хвостов). Гораздо лучше добавлять трифторуксусную кислоту для этой цели.
Этот прием используют и в обращенно-фазовой хроматографии. Экспериментально наблюдал, что если сорбент получен с использованием монохлорсилана и эндкэппирован, то кислоту добавлять не обязательно и даже дележка улучшается (ВЭЖХ продуктов окисления - метаболитов арахидоновой кислоты).
С уважением StYV.

[anatoliy]

Есть еще один момент. Иногда высокая концентрация вещества несет себя с фронтом. Я имею ввиду не высокую концентрацию при нанесении, а концентрирование на силикагеле. Я бы попробовал силикагель нанести в хлороформе и продукт тоже. Пару объемов мыть чистым хлороформом, затем можно градиентом или указанной системой. Метанол попробуйте заменить абсом. Пониже будет.

[гаер*]

Есть еще один момент. Иногда высокая концентрация вещества несет себя с фронтом. Я имею ввиду не высокую концентрацию при нанесении, а концентрирование на силикагеле.

Кстати, да. Само себе элюент. Но и при нанесении не надо перебарщивать с концентрацией.

Я бы попробовал силикагель нанести в хлороформе и продукт тоже.

А ещё бы отмыть стабилизатор, высушить и перегнать хлороформ. А то иногда даже немного этанола мешает.

Пару объемов мыть чистым хлороформом, затем можно градиентом или указанной системой. Метанол попробуйте заменить абсом. Пониже будет.

Таки да.