Проблемы с 4-нитрофенилфосфатом

[hivigar]

Уважаемые химики!

Прошу вашего совета. Имеется бариевая соль 4-нитрофенилфосфата. Для постановки активности фермента в почве (щелочная фосфатаза) нужно получить раствор субстрата довольно высокой концентрации, порядка 0,1M. Бариевая соль нерастворима, и ее надо перевести в натриевую. Единственный вариант перевода, который я нашел в литературе предполагает растворение сабжа в 1mM HСl и затем прибавление сульфата натрия. Но там для активности фосфатазы в тканях и концентрации субстратного раствора очень низкие. Мне же нужна довольно высокая, и соответственно гораздо больше солянки для вытеснения бария. Я уже пробовал растворять в 1M HCl, но похоже, эфиру такое обращение пришлось не по душе и он гидролизовался.
Проверял я вот как: после растворения бариевой соли и высаживания бария, я добавил эквивалентное количество NaOH, что привело к развитию интенсивной желтой окраски 4-нитрофенола. Затем я несколько раз экстрагировал свободный пара-нитрофенол бутанолом, раствор полностью обесцветился. После этого я решил проверить, остался ли там негидролизованный пара-нитрофенилфосфат, отобрал немного раствора, прибавил солянки и прогрел несколько минут при 90 С. Затем добавил щелочи, и интенсивность окрашивания была очень низкой. Из этого я сделал вывод, что эфиру в результате моих действий пришел конец.

Собственно, вот в чем вопросы: можно ли как-то иначе, более мягко, заменить барий на натрий, не разрушив эфир? Может быть, этот процесс можно провести в неводной среде, а скажем, в ДМСО, для снижения скорости гидролиза эфира? Если есть какие-то идеи, поделитесь пожалуйста. А то обидно, субстрат вроде вот он, а сделать ничего с ним не выходит.
Заранее большое спасибо.

[Phobos]

Я бы сперва попробовал простую реакцию обмена с сульфатом натрия - ибо растворимость сульфата бария должна быть еще меньше, чем у Вашей исходной соли. Процесс равновесный - по идее Вы должны будете наблюдать постепенное увеличение концентрации своего фосфат-аниона в растворе. Возьмите грамм 10 своей соли в литре воды, померьте концентрацию бария в растворе над осадком - если получится величина на пару порядков выше, чем у сульфата бария, то рано или поздно процесс придет к завершению. Концентрация бария будет все время постоянной, под конец должна упасть до нуля практически.

[hivigar]

А поверхность соли не будет при этом пассивироваться слоем барита? Или стоит растирать при этом в ступке?

[Phobos]

Можно изначально очень мелко измельчить в кофемолке, в пудру. Можно добавлять исходную соль маленькими порциями. Сперва прикиньте на небольшом количестве, работает ли.

[avor]

Проще купить натриевую соль. Но если нет такой возможности я бы лучше попробовал бы ионный обмен в безводной среде. Можно посто при встряхивании избытка натриевого катионобменника с раствором бариевой соли. Вот какой растворитель выбрать сказать не берусь, начал бы с какого-нибудь ацетона или сложного эфира типа этилацетата.

[chemist]

Иониты в органических растворителях не работают, только в воде и с малыми концентрациями. Автору темы нужна большая, значит элюат нужно будет упаривать, но не гидролизнётся ли? Если потребность небольшая и одноразовая, то уж лучше купить, чем продолбаться неизвестно сколько и прийти к такому же выводу.

[hongma]

Методика, примененная вами настолько варварская, что отрицательный результат вполне предсказуем.
ПНФФ настолько нежен, что его растворы не стоит сколько-нибудь долго держать уже при комнатной температуре
Единственный для вас разумный вариант - отвесить 1-2 г бариевой соли, залить водой из расчета примерно 5-10% конечноцй концентраци и внести стехиометрическое количество сухого сульфата натрия. Затем мешалка + холодильник на ночь. Утром в центрифугу и надосадочная жидкость может идти как маточный раствор ПНФФ..