Необходимо сшить 2 белка между собой в соотношении 1:1. Один из белков находится в форме сукцинимидного эфира. Ситуация осложняется тем, что второй белок находится в смеси с реополиглюкином - полимером глюкозы с молекулярной массой 30-40 кДа. Вот тяжкие сомнения меня гнетут - не пойдет ли каких-нибудь побочных реакций с этим декстраном? 
Реакцию собираюсь проводить в боратном или бикарбонатном буфере рН 8.0-8.5, температура +4. Очень нужно авторитетное мнение синтетиков. Заранее спасибо.Присоединяюсь к мнению. Кристина! не парьтесь. Метьте так. Не должен NHS реагировать с полисахарами.Semenych писал(а):Есть мнение что NHS-эфиры обычно не используют для варки сложных эфиров, поэтому на мой взгляд декстран реагировать не должен. Но и законы Мерфи никто не отменял. Для надёж-ти лучше почиститься.
Конечно это создаст ряд проблем, которые потом придется долго и мучительно решать. Соотношение при сшивке должно быть получено примерно 1:1. При этом понятно, что мы в любом случае получим некое распределение. Если предположить, что декстран не будет участвовать в реакции, тогда можно было бы взять соотношение реагентов белок/эфир как 1:1,1 или 1,2 например с учетом реакции гидролиза эфира. Если же декстран-таки будет участвовать, то при таких соотношениях я получу только часть белка биотинилированного. Причем непонятно, насколько эта часть будет велика или мала. И чисть его потом от непрореагировавшего...Большой избыток эфира биотина я взять не могу, поскольку тогда у меня будет пришиваться больше молекул, чем нужно. Спасибо за рекомендованную литературу. Посмотрю.Semenych писал(а):Для пристрелки по варке эфиров можно глянуть Larock-а, и Гершковича. Ещё коллеги выкладывали классику Bodanszky по пептидам. Ежели никто не опередит, то вечером гляну. Интересно, а ежели будет биотинилированный декстран, он вам большую каку сделает?
Убедили, не поспоришь. Я об этом как-то не подумалаUpstream писал(а):При указанных соотношениях (обычно эфира берут гораздо больше) Вы получите много и непрореагировавшего белка и бис-биотинилированного и сделать с этим ничего нельзя. NHS-эфир это не собака-ищейка, натренированная на поиски немодифицированного белка. А про гликан - забудьте. Ведь у Вас в белке как минимум десятка два экспонированных гидроксилов серина и треонина + вода в буфере.
Ваши бы слова да богу в ушиSemenych писал(а):В общем по Bodanszky есть переэтерификация, но п-нитрофениловых в замещённые бензиловые и в присутствии имидазола. В вашем случае декстран видимо стоит в сторонке и тихо курит, пока NHS-Biot полиокучивает белок.
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 16 гостей
