Очистка нуклеотида на ионообменнике

[Redmannn]

Доброго времени суток.
Вопрос такой: требуется почистить нуклеотид монофосфат (получен реакцией фосфорилирования нуклеозида) на анионообменнике. К сожалению, с колоночной ионообменной хроматографией дела раньше не имел. Как промывать и готовить колонку понятно, правда не совсем понятно в какой форме лучше использовать анионообменник в ацетатной или в формиатной?
Главное что хотелось бы выяснить как и чем элюировать соединение.
Наносить планирую в форме натриевой соли (pH около 7). Сам нуклеотид в воде растворим плохо (1г в 100мл воды).

Заранее благодарен за любую инфу по этому поводу.

[chemist-s]

Если вещество ограниченно растворимо в воде, то м.б. его просто из нее и перекристаллизовать и не заморачиваться с ионитами?

[Redmannn]

перекристаллизация есть сразу после реакции, но чистота еще не идеальная.

[зыркало1]

Где-то встречала, что цвиттер-ионы сажают на смолы в метаноле, а смывают водой...

[SkydiVAR]

Доброго времени суток.
Вопрос такой: требуется почистить нуклеотид монофосфат (получен реакцией фосфорилирования нуклеозида) на анионообменнике. К сожалению, с колоночной ионообменной хроматографией дела раньше не имел. Как промывать и готовить колонку понятно, правда не совсем понятно в какой форме лучше использовать анионообменник в ацетатной или в формиатной?
Главное что хотелось бы выяснить как и чем элюировать соединение.
Наносить планирую в форме натриевой соли (pH около 7). Сам нуклеотид в воде растворим плохо (1г в 100мл воды).

С нуклеотидами не работал, только с аминокислотами и чистил их на катионите, однако идея та же, как я понимаю. Сразу вопрос: Почему анионит не в ОН- форме? Продукт развалится? Если выбирать из ацетата и формиата я бы предложил ацетат - муравьиная кислота достаточно сильная, не уверен, что кислотность продукта будет выше и он сможет вытеснить формиат. После того, как посадите вещество на смолу - мыть водой до нейтральной реакции (или отсутствия натрия в элюате). Элюировать летучей сильной кислотой слабой концентрации (солянка, например, или та же муравьинка, или ТФУК), в растворе которой продукт будет устойчив, потом - гнать воду с кислотой на роторе.

Где-то встречала, что цвиттер-ионы сажают на смолы в метаноле, а смывают водой...

Такое тоже слышал, но сам работал только с водными растворами.

[StYV]

Чистить на анионообменнике в системе слабая соляная кислота - сильная соляная кислота, лучше конечно в градиенте с УФ-детектором. Так проще подобрать условия. Продукт упарить на роторе. В качестве сорбента можно взять ДЕАЕ-целлюлозу.
С уважением StYV.

[Redmannn]

StYV, вопрос в том, если мой продукт (нуклеотид монофосфат) расстворим в воде 1 г на 100 мл, то если я его буду вводить на колонку в натриевой форме а мыть кислотой, то мне кажется он в виде кислоты просто механически застрянет в колонке, или я чего-то не понимаю? А если не кислотой, то чем тогда мыть?

[StYV]

Тогда работать в градиенте хлорида натрия, потом вот избавляться от него или плюнуть и использовать далее как есть.
С уважением StYV.

[anatoliy]

мой продукт (нуклеотид монофосфат) расстворим в воде 1 г на 100 мл

В метаноле насколько он растворим?

[SkydiVAR]

StYV, вопрос в том, если мой продукт (нуклеотид монофосфат) расстворим в воде 1 г на 100 мл, то если я его буду вводить на колонку в натриевой форме а мыть кислотой, то мне кажется он в виде кислоты просто механически застрянет в колонке...

ПМСМ, будет он не в виде кислоты, а в виде солей по азотам и выйдет из колонки запросто. А чтобы подтвердить/опровергнуть сию гипотезу потребен эксперимент.

[Redmannn]

"метаноле насколько он растворим?"
НЕрастворим