Препаративная тонкослойная хроматография

[Masterboy]

Глубокоуважаемые коллеги!
Свидетельствую Вам свое почтение и пишу с тем, чтобы поинтересоваться, есть ли у кого экспериментальный опыт по проведению ПТСХ? Как я успел заметить, эта тема, как-то между строк, проходила в различных обсуждениях. В этой связи, хотелось бы объединить все эти рассуждения воедино.
Особенно буду признателен за комментарии по поводу:
нанесения образца (кто и как это делает)
загрузок вещества на пластинки с толщиной слоя 2 мм (примерные границы, Aldrich дает, что можно грузить до 500-1000 мг, так ли это?)
способ экстракции целевого соединения из снятой полосы сорбента
Заранее благодарю!

[Phobos]

Загрузка зависит от степени разделения. Как правило, ПТСХ пользуются, когда есть несколько точек, идущих близко друг к другу и разделение на обычной колонне невозможно. Платы довольно дорогие, поэтому для обычных, легких разделений я их не пользую. Думаю, 1 г - это все же замного. У меня обычно уходит ~50 мг на плату 0.5 мм.
Для нанесения я обычно беру пипетку с обломанным, затем оплавленным и чуть изогнутым концом. Отверстие чем тоньше, тем лучше. Оплавление для того, чтоб конец пипетки мог скользить по плате, не царапая ее.
Растворитель для нанесения - чем менее полярен, тем лучше (вещество во время нанесения не размазывается по плате). Не сильно летучий (не будет сам из пипетки выливаться во время нанесения). Гексан идеален, если в-во в нем нерастворимо - добавить немного хлороформа.
Рисую карандашом линию где-то 2 см от нижнего края платы, на 1 см отступить от боковых краев. Наносить р-р тонкой линией, ждать пока подсохнет, прежде чем проходить одно и то же место по второму разу.
Растворитель брать примерно вдвое менее полярный, чем нужно для проявления платы на обычной ТСХ, и прогнать два-три раза. Потм кладем плату под УФ, рисуем карандашом границы пятен, соскабливаем силику с каждого пятна в отдельный стаканчик/вайл на 20 мл, заливаем этанолом, растираем все комки в порошок, даем поболтаться минут 10, фильтруем, упариваем.

[StYV]

Очень удобная вещь - Мерковский силикагель ТСХ для закрепленного слоя в металлических банках. Рецепт написан на банке. К силикагелю добавляем дистиллированную воду (см. рецепт), крутим на роторе до образования гомогенной массы, выливаем на стеклянную пластинку и раскатываем слой раскаткой примерно 1.5 мм. Сушим на воздухе, затем активируем в шкафу (см. рецепт). Получаем пластинку с толщиной слоя около 1 мм.
Стандартно нагрузка на пластинку с толщиной слоя 1 мм около 100 мг смеси. На бывают случаи, когда приходиться наносить намного меньше, например, при очистке изомеров динитропиренов больше 5 мг не удается. Могут быть случаи , позволяющие наносить намного более 100 мг. Все в основном зависит от степени разделения и растворимости.
Собранную фракцию обычно моют на шотте, в особых случаях на центрифуге в пробирках.
С уважением StYV.

[Semenych]

применял ПТСХ для производных фуллерена, загрузки мизерные, делал аналогично Phobos-у. наносил с пипеткой на пластины с песком(мерковские) 10на10см. всё работает. экстрагировал толуолом в стаканчике с соскобленной твердой фазы, иногда подогревал.

[Zord]

Делал все примерно как описано выше,накатывал пластинки 20х20, слой 0.5, с помощью силикагеля Merck и спец. накаточной машинки, пластинки надо хорошо высушить от спирта, иначе делится плохо,эффективная загрузка на такую пластинку-100 мг. в-в, которые на ТСХ ходят почти рядом. Также проводил препаративное разделение на аналитических пластинках Мерк, но там загрузка 10-20 мг. , не больше. И не смывайте в-во метанолом, ибо он чтото там намывает из силикагеля.

[anatoliy]

Я использую пластиковые наконечники от автоматических пипеток для нанесения.

[Любитель_Манниха]

Мерк-мерк... дёшево и сердито: берётся стеклянная пластина, трётся наждаком, чтобы силикагель не соскальзывал. Наносится силикагель, высота слоя и его гладкость регулируется девайсом типа "карандаш + кусочки резинового шланга по бокам" Пластина устанавливается в кристаллизатор, куда собственно и наливают элюент на импровизированные подпорки, снизу подпирается двумя стеклянными пластинками, между которыми зажата фильтровальная бумага, которая собственно и подаёт элюент на пластину. Вот как-то так Для снятия в-в с сорбента было достаночно закинуть его на Шотт и промыть пару раз спиртом, ацетонитрилом или хлороформом.

[Sokolov]

Могу добавить, что можно делать и на оксиде алюминия. Количество то же - до 50 мг. Проявлять в УФ, вымывать этанолом

[StYV]

Еще немного.
Если слой незакрепленный, а силикагель чешский, то бывает что слой трескается. Тогда использовать смесь силикагеля ТСХ и колоночного (тоже чешского), соотношение подбирать опытным путем.
С уважением StYV.

[Masterboy]

Глубокоуважаемые коллеги!
Разрешите мне выразить глубокую признательность за все те ценные практические советы, которые Вы дали по этому, на мой взгляд, совершенно замечательному методу разделения! С целью уточнения скажу, что мы обзавелись готовыми пластинами от Мерк и Aldrich, размерностью 20 на 20 см, с толщиной слоя сорбента 2 мм. Не желая злоуптреблять Вашей отзывчивостью, хотел бы, все же, задать еще несколько уточняющих вопросов:
Phobos, какой смысл Вы вкладываете в слова, прогнать элюент 2-3 раза? Вы имеете в виду, что пластинка погружается в систему, элюируется, достается, сушится и то же самое делается еще 2 раза?
Любитель Манниха, мысль про кристаллизатор мне в голову не приходила! Но у нас есть камера для обычной ТСХ (большая), в которую пластинки входят. Вопрос: играет ли роль угол уклона пластины, если она - фабричная? Не окажется ли, что угол в 70 градусов, взамен 20 драматически отразится на процессе разделения? Можно ли погружать пластину в элюент, как делается в обычной ТСХ или необходимо использовать приспособление с фильтровальной бумагой?
Zord, насколько я понял, если Вы берете в среднем 100 мг вещества на пластину 20 на 20, 0.5 мм, то, вероятно на наших пластинах можно довести загрузку до 400 мг?
Еще раз, выражаю свою признательность и очень надеюсь получить Ваш ответы!

[Любитель_Манниха]

Вот влияние угла наклона пластины не исследовали и фабричные пластины, хотя лежат в загашнике, не юзал, помолчу

[Phobos]

Phobos, какой смысл Вы вкладываете в слова, прогнать элюент 2-3 раза? Вы имеете в виду, что пластинка погружается в систему, элюируется, достается, сушится и то же самое делается еще 2 раза?

Да, именно так.

[Masterboy]

Добрый вечер, Phobos!
А какое преимущество дает многократное элюирование по сравнению с однократным?

[Любитель_Манниха]

Можно градиент устроить Типа прогнал немного гексан-ЭА 1:1, видишь, что еле расходятся пятна, вынул, посушил, залил другой элюент, разделил

[Masterboy]

Тоже верно! Этакий, экспресс-подбор системы. Вопрос лишь в том, что после каждого элюирования, пластина будет дезактивироваться, что потребует адекватной корректировки элюирующей силы системы.

[Phobos]

Это аналогично прогонке по колонне с меньшей полярностью элуэнта - больше времени, но лучше разделение. Но, в отличие от колонны, после того, как элуент достигает верхнего края пластины, скорость его движения замедляется (слива нет) и диффузия начинает портить разделение. Поэтому приходится вынимать, обдувать феном, ставить снова.

[StYV]

Есть еще такой способ:
- край пластины ТСХ торчит наружу, фронт растворителя доходит до края и испаряется в воздух, получается как-бы непрерывная ТСХ.
Этот способ описан в литературе.
Видел результаты такой аналитической ТСХ у коллеги - очень впечатлило по разделению.
С уважением StYV.