Интерпретация ЯМР аминокислоты

[Lyol'ka]

Есть аминокислота, выделенная из раствора уксусной кислоты. Само собой разумеется в ЯМР спектре (снимался в воде) кроме пиков аминокислоты, также высветился синглет уксусной. Вопрос: Можно ли после интегрирования прикинуть, сколько молекул уксусной кислоты приходится на молекулу аминокислоты? или площади пиков разных веществ в смеси даже примерно сравнивать нельзя?

[Serty]

Можно Мольное соотношение веществ именно так и определяют.

[SkydiVAR]

По протоннику, разумеется.

[wait]

В ЯМР у одинаковых магнитных ядер - одинаковая чувствительность (даже если они в разных соединениях), поэтому площадь пиков пропорциональна их количеству. Т.о. относительные соотношение ядер можно получить легко. При желании можно определять концентрацию интересующих ядер (методом внутреннего стандарта или калибровкой). Однако, есть некоторые тонкости: во-первых, ядра отличающиеся окружением (или в различных молекулах) могут релаксировать сильно по-разному, по-этому для получения точных результатов используют либо спектр записанный с одного скана (без "dummy" сканов в bruker-ной терминологии), либо ждать пока все отрелаксирует (обычно, используют компромис - flip angle ~30-40 deg, d1=8-16 sec для 1H) или добавляют релаксант. Во-вторых, из-за особенностей АЦП сигналы, сильно отличающиеся по-интенсивности, могут давать искаженную информацию, поэтому часто сравнивают интересующий сигнал с сателлитами 13С внутреннего стандарта. Иногда, эти самые сателлиты убирают развязкой от углеродов - тоже для получения лучших результатов. Так же, сильно широкие линии с узкими лучше не сравнивать по этим же причинам. В-третьих, лучше чтоб ни один из интересующих сигналов не попадал в центр спектра - на частоту импульса. Так же, перед количественными измерениями, можно убедиться в нормальной работе самого спектрометра (существуют специальные тестовые образцы, обычно, поставляемые со спектрометрами)

[wait]

Вообщем, для количественных данных засад - куча. Вспомнил ещё одну - обмен.

[Phobos]

Если Вам просто прикинуть соотношение, с довольно большой точностью - то годится. Для публикации, например, вполне хватит. Если нужа строгая аналитическая процедура, да еще и с валидацией по требованиям фармакопеи - тоже возможно, но на пару порядков больше мороки и писанины. Для такого случая самое простое - купить стандарт, не содержащий уксусной к-ты, зате сделать калибрацию, добавляя известные количества уксусной. ДОлжно быть хорошее разделение пиков плюс еще какие-то требования к самой системе (помню, например, что в компьютере должен быть заблокирован вход для флешек и СД). Но мне кажется, это не Ваш случай.

[Lyol'ka]

Действительно, мне не нужна 100%-ная точнойсть. Надо лишь ориентировочное значение, чтобы знать сколько данного соединения дальше вводить в реакцию.
Смущает то, что аминокислота, выделенная из примерно 0,1 М уксусной, по полученному ПМР содержит 0,15 моль уксусной кислоты на 1 моль аминокислоты. Условия записывания спектра я, само собой разумеется, не контролирую. И аминокислота в своей структуре содержит несколько карбоксильных групп - может они занимают место уксусной около аминогруппы..

[Phobos]

Дык Вы не по карбоксилу интегрируйте, а по синглету ацетильному

[Lyol'ka]

Конечно, интегрирую по синглету. Записываю спектр в воде, а в ней карбоксильные группы не проявляются.