Классическая Флэш-хроматография.

[pH<7]

Каждый органик сталкивается с необходимостью очистки своих драгоценных. Это область настолько сложна и индивидуальна для каждого вещества, что ужас просто. Особенно тонка и нежна хроматография. Ну да вы сами в курсе.

Читал статью про полный синтез Дайнемицина (Myers, JACS, 1997), выложу позже, если надо. Никогда, кстати, не видел таких статей раньше - 23 страницы с самыми грязными подробностями, в том числе экспериментальными. Так вот, что меня удивило. Они ЛЮБОЙ синтез выливают в фосфатный буфер, отделяют органическую фазу, экстрагируют водную соответствующим растворителем, концентрируют и очищают флэш-хроматографией. В том числе, они разделили два соединения, отличающиюся ТОЛЬКО конфигурацией одного хирального центра, с разницей Rf в одной и той же системе 0,01, в количестве 13 грамм для одного или 3 грамма для другого! Дана ссылка на эту чудо-хроматографию (статья лежит в обменнике). Прочитал я эту статью и показалось мне, что что-то от меня скрывают. Потому что в статье про хроматографию такими высотами не пахнет.

Вот скажите мне, чего я не понимаю? Интересно также почитать про ваши хроматографические достижения.

Наконец, правильно ли я понимаю, что приставке "флэш" соответствует относительно небольшой слой сорбента и продавливание воздухом?

Cherep: Протонище извини, немного подправил заголовок, чтобы уменьшить его fuzzyness

[Vetal]

Мне кажетса, что флэш, это означает, что просто под давлением (воздухом или еще чем).... я не думаю что это как то связанно с размером колонны.

А еще вопрос - а из-за чего у энантиомероф Рф разные? Или сорбент хиральный?

[FOX-7]

Тема затронута очень интересная. Хотелось бы обсудить множество вопросов возникающих при практическом использовании флэш-хроматографии. Ну например, от конструкции самой установки (можно и кулибинские варианты) и типа сорбента, до того, что можно, а что нельзя делить. Например, бытует мнение, что если между пятнами на ТСХ можно всунуть свой палец , то такие соединения разделить хром. можно.

[Phobos]

Речь идет об эпимерах - диастереомерах, отличающихся конфигурацией только одного центра из нескольких.
Флэш - да, означает поддавливание воздухом. Однако, если будет встречен термин "column chromatography", вполне вероятно, что речь идет о том же самом. Любую мелкую силику приходится поддавливать.
Статью потом с работы скачаю, дома даже "Акробата" нету.
У меня были следующие достижения. Удалось очистить довольно сложнозамещенную цепочку (~ 15 атомов С) с двойной цис-связью от примеси транс-изомера, на силике с добавкой 10% нитрата серебра. Если надо, могу найти источник. Там же утверждалось, что разделяющую способность силики для некоторых классов веществ увеличивает добавка борной кислоты.
В общем, склонен думать, что если есть хоть какое-то разделение на TLC, то и на колонне можно поделить.

[SIG]

Ага, вот , наконец, и до флаш-хроматорграфии дошли.... Насколько мне известно, сейчас нет четкой разницы между флеш- и колоночной хроматорафией, просто то, что делается на обычных (не мелких) сорбентах называют флеш-хроматографией, чтобы не путать с HPLC.Сорбенты могут быть не только обычные, но и обращенные, модифицированные, ect. Широко используются уже готовые картриджи или готовые колонки. Давление может создаваться газом, например, как в простых системах http://www.biotage.com/, а может и плунжерным насосом, причем с использованием градиента http://www.buchi.com/Preparative-Chroma ... .65.0.html. Далее, могут стоять обычные хроматографические детекторы, коллекторы фракций и тому подобное. Давление может использоваться довольно высокое, до 50 атмосфер. Возможна полная автоматизация и использование параллельных колонок для одновременного разделения нескольких веществ. Справедливости ради, следует сказать, что цена автоматических систем для флеш-хроматографии часто выше, чем HPLC.
Что касается личных достижений, то мне удавалось делить на стеклянных колонках hand made вещества полиеновой структуры прибл. С17, различающиеся на фрагмент СH=CH2CHO, разница в Rf порядка 0.07. Количества порядка 10 г за один проход, силикагель для ТСХ, фракция 0.05 мм 40 мкм, давление порядка 2.5 атм, создавалось сжатым азотом. Колонка диам.35 мм ,длина 70 см. Всего поделили около 100 г, в несколько приемов.

[pH<7]

фракция 0.05 мм 40 мкм

-

[mitsu]

фракция 0.05 мм 40 мкм

-

40-50 микрон, стандартный размер в принципе, а что?

[mitsu]

Ага, вот , наконец, и до флаш-хроматорграфии дошли....

Это одно и то же, во всяком случае в повседневной жизни

Насколько мне известно, сейчас нет четкой разницы между флеш- и колоночной хроматорафией, просто то, что делается на обычных (не мелких) сорбентах называют флеш-хроматографией, чтобы не путать с HPLC.Сорбенты могут быть не только обычные, но и обращенные, модифицированные, ect. Широко используются уже готовые картриджи или готовые колонки. Давление может создаваться газом, например, как в простых системах http://www.biotage.com/, а может и плунжерным насосом, причем с использованием градиента http://www.buchi.com/Preparative-Chroma ... .65.0.html. Далее, могут стоять обычные хроматографические детекторы, коллекторы фракций и тому подобное. Давление может использоваться довольно высокое, до 50 атмосфер. Возможна полная автоматизация и использование параллельных колонок для одновременного разделения нескольких веществ. Справедливости ради, следует сказать, что цена автоматических систем для флеш-хроматографии часто выше, чем HPLC.

Пока что все это экзотика за счет цены во многом, тем более что это и есть полный набор для HPLC плюс машинка для упаковки колонок. С моим хорошим знакомым вышло вот что, - он хотел чистить кое-что через сефадекс и решил попробовать с насосом Buchi. День они возились, потом оказалось, что насос не может качать смеси с высокой концентрацией хлороформа.

Что касается личных достижений, то мне удавалось делить на стеклянных колонках hand made вещества полиеновой структуры прибл. С17, различающиеся на фрагмент СH=CH2CHO, разница в Rf порядка 0.07. Количества порядка 10 г за один проход, силикагель для ТСХ, фракция 0.05 мм 40 мкм, давление порядка 2.5 атм, создавалось сжатым азотом. Колонка диам.35 мм ,длина 70 см. Всего поделили около 100 г, в несколько приемов.

Здесь ключевой момент пропорция продуктов. Делить 5/95 это не то что делить 95/5 и уж совсем не то что 50/50.

[S324]

Тема затронута очень интересная. Хотелось бы обсудить множество вопросов возникающих при практическом использовании флэш-хроматографии. Ну например, от конструкции самой установки (можно и кулибинские варианты) и типа сорбента, до того, что можно, а что нельзя делить. Например, бытует мнение, что если между пятнами на ТСХ можно всунуть свой палец , то такие соединения разделить хром. можно.

Мы на фильтр Шота(100, 250, 500мл) напаеваем трубку и краник Такие у нас колонки.
В связи с избытком силикагеля народ обленился уже кристализовать вещества, всё заливает на колонку. В книгах пишут, что хорошие колонки в которых l/d=40, у нас ~ 10-14 и результаты нормальные. По мне так лучше сделать 2 короткие и толстые, чем одну длинную и тонкую колонки. Разделял диастереомеры на обычном силикагеле. Сейчас колоню алифатический альдегид(нету хуже вещества!). В хлороформ\метанол раз дал ацеталь, раз не дал
Буду подбирать систему растворителей
Этилацетат у нас не любят, говорят, что в нём есть уксус, который с силикагелем рвёт вещества.
Интересно идут амины(элюэнт - хлороформ) - зона амина горячая (при количестве 80г)
Говорят, что Акросовский силикагель лучше Олдричевского
Под давлением делал только, когда элюэнтом был пентан и из колонки самотёком он не вытекал.
А при давлении 0.5атм стекляные колонки очень даже хорошо разрывает

[SIG]

Здесь ключевой момент пропорция продуктов. Делить 5/95 это не то что делить 95/5 и уж совсем не то что 50/50.

В том случае было приблизительно 30 процентов целевого продукта, 60% -исходного, остальное - неизвестно что.
Про силикагели - на мой взгляд лучший Merck, затем Aldrich, Acros и Lancaster. Мелкий чешский тоже ничего. А что колонки разрывает, так это как повезет. Ну взорвалась один раз из 25 при давлении 3 атм, что поделать. Можно было не давить, но тогда разделение занимало сутки. Заказали покрепче. Обычно проламывает фильтр. Тогда у меня выбора не было, шеф сказал: "Дели, а как меня не волнует, хоть на ТСХ но чтоб через 3 недели вещества 100 г было..."
Кстати, интересно, как на коротких колонках делить. И еще интересно про амины, у меня с ними были вечные проблемы. на силикагеле они сильно размазываются, а если подбавить амин в элюент, то непонятно, где и как твое вещество вылезет. Иногда спасала основная окись алюминия. А лучше всего высоковакуумная перегонка, правда сейчас хорошего насоса нет, приходится выдумывать.

День они возились, потом оказалось, что насос не может качать смеси с высокой концентрацией хлороформа.

А вот это важная информация. С каким элюентом они работали и что за неисправность возникла? Люди с Buchi меня уверяли, что их система как раз устойчива к хлорорганике. Не могли бы Вы описать данную проблему поподробнее.

[Vetal]

А еще мы бывает, када ставим колонну, освещаем ее УФ светом. Если в-во поглащает, то хорошо видно где именно на колонне оно находитса... бывает помагает начать собирать в-во вовремя, т.к. почему-то случаетса так, что временами в-во в колонне идет быстрее чем на пластинке...

[FOX-7]

Про силикагели - на мой взгляд лучший Merck, затем Aldrich, Acros и Lancaster. Мелкий чешский тоже ничего.

И еще интересно про амины, у меня с ними были вечные проблемы. на силикагеле они сильно размазываются, а если подбавить амин в элюент, то непонятно, где и как твое вещество вылезет. Иногда спасала основная окись алюминия. А лучше всего высоковакуумная перегонка, правда сейчас хорошего насоса нет, приходится выдумывать.

1. На мой взгляд лучший силикагель SiliСycle, чуть хуже Merck, совсем хуже Aldrich, Acros и Lancaster.
2. Для аминов, добавляй триэтиламин, это должно помочь да и удаляется он потом легко.

от Serge: список компаний-поставщиков силикагеля можно найти тут: http://www.chemport.ru/tradecenter232491.html и тут: http://www.chemport.ru/products7614.html

[mitsu]

День они возились, потом оказалось, что насос не может качать смеси с высокой концентрацией хлороформа.

А вот это важная информация. С каким элюентом они работали и что за неисправность возникла? Люди с Buchi меня уверяли, что их система как раз устойчива к хлорорганике. Не могли бы Вы описать данную проблему поподробнее.

Oн просто не качал. Смесь была из серии хлороформ/метанол/вода 88:11:1. T.e. насос (их было два) работал, метанол качал без проблем, а вот элюент - нет. Люди с Buchi уверяли, что они такого никогда не видели, что есть вариант с керамическим поршнем и уж он-то наверняка... но уже было понятно что это дикий геморрой за дикие же деньги.

Про силикагели - на мой взгляд лучший Merck, затем Aldrich, Acros и Lancaster. Мелкий чешский тоже ничего. А что колонки разрывает, так это как повезет. Ну взорвалась один раз из 25 при давлении 3 атм, что поделать. Можно было не давить, но тогда разделение занимало сутки. Заказали покрепче. Обычно проламывает фильтр.

Я этих силикагелей перепробовал кучу и особой разницы в качестве разделения не ощутил. Мне кажется что та банка что у меня сейчас лучше пакуется, но с учетом того что я сравниваю с другой колонкой и другим элюентом поручиться не смогу. Что до Олдрича и пр. - кто знает чей <b>силикагель</b> они пакуют. Ясно ведь не сами делают. Нет даже гарантии что он там один и тот же от партии к партии. А вот колонки с впаяными фильтрами я не люблю и не пользую - дороже они, мыть тяжелее, сушить тож. А рвать колонки у меня пока ни разу не рвало, хотя я давлю не стесняясь.

Кстати, интересно, как на коротких колонках делить.

Легко. У меня были раньше колонки 80 и 100 мм диаметром, и я паковал не больше 15 см в высоту. Да и сейчас у меня стандартный размер 50х350 мм.

А этилацетат - я всегда с него начинаю систему искать. Мой главный растворитель.

[pH<7]

Насчёт УФ:




по-моему, красиво. Если б ещё слой нормальный был...

[SIG]

А вот колонки с впаяными фильтрами я не люблю и не пользую - дороже они, мыть тяжелее, сушить тож. А рвать колонки у меня пока ни разу не рвало, хотя я давлю не стесняясь.

Вопрос: А какие колонки используете Вы? Со стеклянным фильтром мне делали на заказ, приблизительно 20$ за колонку 35*900мм. По форме -прямая труба, сверху шар, мл на 500, снизу фильтр.На такой колонне в удачном случае можно выделить грамм 20, иногда больше. Мне интересно, сколько можно разделять на коротких колонках?
Использование триэтиламина в элюенте мне не очень нравится, поскольку трудно добитсься восвпоизводимости. Немного перельешь, и все...
Аналогичная фигня была с кислотами - пару капель муравьинной кислоты в элюент, и Rf на ТСХ меняется от 0.2 до 0.9.

[Cherep]

А в России можно посуду с шаровыми шлифами заказать?

[mitsu]

Вопрос: А какие колонки используете Вы? Со стеклянным фильтром мне делали на заказ, приблизительно 20$ за колонку 35*900мм. По форме -прямая труба, сверху шар, мл на 500, снизу фильтр.На такой колонне в удачном случае можно выделить грамм 20, иногда больше. Мне интересно, сколько можно разделять на коротких колонках?

Taк а примитивно простая колонка-то. Прямая трубка 50х400 со шлифом . Отдельно, - литровый шар. Влезает 300 г силикагеля - если по максимуму. Делю я на ней обычно грамм по 10, но вот я глянул - полно записей типа Rf=0.90 5-10%, Rf=0.60 80-90%, Rf=0.15 5-10%, загрузил 20 г, снял 16 г. Но понятно, что при таких разницах в Rf сложности никакой в разделении нет.

[Vetal]

Блин. Вот мы вчера поставили колонну - на 20мг в-ва 40 мл (1:2000) силикагеля. РФ нормальные (примерно 0,5 0,4 0,3), фракции по 3 мл. Ничего не разделилось. И уже не первый раз....

А бывает РФ отличаютса мало, ставишь миниатюрную колонну (1:50, бывает
еще меньше) и все шикарно делитса?

В чем может быть дело?

[SIG]

А в России можно посуду с шаровыми шлифами заказать?

Можно, если повезет.... А серьезно - мне пару раз приходилось такое делать, но шлифы срезали с буржуйских колб. Про массовое производство шаровых шлифов здесь я ничего не слышал, видимо, его просто нет.

[Cherep]

Понятно. Но тогда и колонку из Pyrex-а надо както делать.

Просто с коническим шлифом непонятно как адаптер с байпасом прижимать. Я видел специальные колонки - там этот адаптер и отдельно шар (для растворителя) на конических шлифах. Но эти шлифы плотно держатся за счёт некой накидной пластмассовой гайки.

Ваще чем больше я стеклянных колонок гоняю, тем больше хочу попробовать ботву типа той что Biotage делает. В ноябре одна такая стеклянная лопнула, хорошо, что всё мимо морды пролетело, хоть я в очках был, но всё-равно стрёмно.

Гонял я, кстати, на HPLC както 300 mg на силикагелевой колонке (ей около 20 лет было, но ничё). Правда делил за раз по 50 мг. Плохо что расход растворителя большой.