Вопрос по ВЭЖХ с уклоном в органику

[waxman]

Здравствуйте уважаемые коллеги, в принципе наверно лучше бы обсуждать в аналитике, но уже написал здесь. Хотелось бы услышать Ваше мнение относительно возможности разделения таутомеров методом ВЭЖХ. Речь идет о двух пиках с разницей времени выхода в минуту. Таутомерия тион-тиольная, сорбент не модифицирован (в смысле без всяких там хелатных присадок и т.п.), вывод о том что это таутомеры делался по одинаковым значениям m/z . В принципе это не моя, но уже опубликованная работа. Я предложил другое объяснение второму пику (примесь изомера в исходнике). Мне сказали что я очень и очень неправ и не компетентен в вопросах хроматографии, теперь пытаюсь докопаться до истины.

[Phobos]

Вообще-то это лучше доказывать на ПМР.

[waxman]

Там пик 3%, про ЯМР объекта ничего не знаю но выводы ими делались по ВЭЖХ-МС.

[Jokermaniak]

Интересно, как по МС сделали вывод о том, что имеют место именно таутомеры? Не диастереомеры, не ротамеры, не инвертомеры, не ещё какие-нибудь хреномеры? И почему таутомеры именно тиокето-тиольные?

Ну да вне зависимости от природы изомерии, тут всё зависит от скорости изомеризации в-ва в условиях делёжки. Грубо говоря, если время полуизомеризации в десять раз дольше времени разделения - можно делить смело. Ну и, роазумеется, всё это имеет физический смысл только в том случае, если есть возможность подавить изомеризацию выделенного вещества...

Чтобы медленнее изомеризовался - охлаждайте и избегайте кислот-щелочей. А вообще если это действительно такая таутомерия, её можно подавить...

[Phobos]

Имхо, лучше сразу взять тот "неправильный изомер в исходнике" в чистом виде, провести с ним реакцию и получить чистый маркер со своим спектром LCMS+NMR. Сравнить с Вашей примесью. Не оно - возможна таутомерия. Оно - сразу поймете.

[amge]

Ну да вне зависимости от природы изомерии, тут всё зависит от скорости изомеризации в-ва в условиях делёжки.

Попалась любопытная статья (приложена), из которой следует, что при подходящей скорости изомеризации (порядка минут) в хроматограмме могут быть пики характерной формы, указывающие на динамический процесс. Можно себе представить, что если такие пики наблюдались, а все динамические процессы, кроме таутомерии исключены, то это и было бы неким доказательством таутомерии.

[Jokermaniak]

Ну да вне зависимости от природы изомерии, тут всё зависит от скорости изомеризации в-ва в условиях делёжки.

Попалась любопытная статья (приложена), из которой следует, что при подходящей скорости изомеризации (порядка минут) в хроматограмме могут быть пики характерной формы, указывающие на динамический процесс. Можно себе представить, что если такие пики наблюдались, а все динамические процессы, кроме таутомерии исключены, то это и было бы неким доказательством таутомерии.

Определить наличие динамики и оценить порядок времен полупревращения можно тучей способов. Проблемы возникают именно на этапе отнесения этой динамики к конкретному равновесию...

[S324]

надо снять один и тот же образец 3-4 дня подряд, если таутомер, то его процентное содержание будет каждый раз другим.

[Jokermaniak]

надо снять один и тот же образец 3-4 дня подряд, если таутомер, то его процентное содержание будет каждый раз другим.

Необязательно. Если смесь изначально в состоянии равновесия, то содержание меняться не будет.

[S324]

будет, проверено на разных веществах с кето-енольной таутамерией.
можно колоть в разных растворителях, тоже процент примеси должен скакать
(хто не скаче - не енол ! ))) )

[Jokermaniak]

будет, проверено на разных веществах с кето-енольной таутамерией.

И с какого бодуна системе самопроизвольно выходить из состояния равновесия?

можно колоть в разных растворителях, тоже процент примеси должен скакать[/size]

Должен, если время полупревращения не милисекундное. Хотя это нечастое явление даже для кето-енольной таутомерии, а для тиокето-тиольной малореально....

[S324]

о тиокето-тиольной тоже думаю, что не будет видно.

[waxman]

Должен, если время полупревращения не милисекундное. Хотя это нечастое явление даже для кето-енольной таутомерии, а для тиокето-тиольной малореально....

Я думал что если время полупревращения милисекундное то разделить на LC вообще нельзя.

[Jokermaniak]

Должен, если время полупревращения не милисекундное. Хотя это нечастое явление даже для кето-енольной таутомерии, а для тиокето-тиольной малореально....

Я думал что если время полупревращения милисекундное то разделить на LC вообще нельзя.

Конечно нельзя, о том и речь...

[S324]

разделить нельзя, но в спектре LC/MS кето-енольную таутомерию видно

[Jokermaniak]

разделить нельзя, но в спектре LC/MS кето-енольную таутомерию видно

Прямо именно кето-енольную? И как её отличить от, допустим, затрудненной инверсии азота, или заторможенного вращения вокруг С-С связи?

[S324]

добавить ТФУ ))

[Jokermaniak]

добавить ТФУ ))

А как это поможет? Равновесие сдвинется? Дак а где гарантия, что кислота не повлияет на другие равновесия?

Это всё косвенные доказательства. На основании них можно предполагать, а не утверждать. Надо ЯМР снимать, корелляционки, устанавливать структуры изомеров.

[Upstream]

В наших краях иногда наблюдаются медленное в масштабе времени ВЭЖХ взаимопревращение цис/транс-конформеров пептидной связи с участием пролинового азота -Xaa-Pro-. Подтверждается такая интерпретация следующим образом. Рехром материи подозреваемых пиков даёт идентичные профили и повышение температуры хроматографического процесса до 50-70°С приводит к коалесценции этих пиков. Возможно, и Вашем случае этот подход должен работать.