Нашел методику по присоединению 5(6)-FAM к глюкозе (глюкозамину):
Растворяли 5(6)-FAM в 0,1 М 2- (морфолино) этансульфоновой кислоты с 0,5 М хлоридом натрия (рН 6,0) Сшивающий агент 1-этил-3- (3-диметиламинопропил) карбодиимид и организующий связь компонент N-гидроксисукцинимид взвешивали в стеклянном флаконе и красителе медленно добавляли раствор Реакционные компоненты вихревые и реагируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Сшивающий агент инактивировали добавлением 2-меркаптоэтанола. Глюкозамин (15 мг) растворяли в 0,1 М бикарбоната натрия (рН 8,3) Реакционный раствор красителя медленно добавляли, в то время как раствор-реципиент непрерывно мешали. Реакционную смесь инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре при непрерывном перемешивании. Реакцию останавливали добавлением 1,5 М гидроксиламина (рН 8,5) к смеси и инкубировали в течение 1 часа при 25 ° С.
Пойдет ли данная реакция?
Чем можно заменить токсичный меркаптоэтанол?
Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину
Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину
Дурной перевод с английского. Лучше приводить оригинал.
А почему не пойдет? Какие у вас сомнения?
А вас не смущает токсичность гидроксиламина? Да,и карбодимид далеко не поваренная соль.
Вы ищите MES, а тем не менее EDAC более дорогой и не менее , а может быть более редкий реагент.
Гидроксисукцинимидные эфиры FAM вполне доступный коммерчески в России продукт можно не заниматься его изготовлением, а купить готовый. И тогда нужен только глюкозамин. Гидроксиламин тоже можно заменить например этаноламином. Но на самом деле можно просто взять избыток глюкозамина.
А почему не пойдет? Какие у вас сомнения?
А вас не смущает токсичность гидроксиламина? Да,и карбодимид далеко не поваренная соль.
Вы ищите MES, а тем не менее EDAC более дорогой и не менее , а может быть более редкий реагент.
Гидроксисукцинимидные эфиры FAM вполне доступный коммерчески в России продукт можно не заниматься его изготовлением, а купить готовый. И тогда нужен только глюкозамин. Гидроксиламин тоже можно заменить например этаноламином. Но на самом деле можно просто взять избыток глюкозамина.
Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину
EDAC я уже заказал.
Гидроксисукцинидные эфиры очень дороги, поскольку флуресцентное соединение глюкозамина будет использоваться как компонент для питательной среды для растений, поэтому миллиграммы это мало, необходимы граммы хотя бы 1-2.
По гидроксиламину спасибо.
И по тиоглиголю я его так-то тоже заказал, но что то учитывая что я не собираюсь очищать результат, не уверен я в его безопастности имеется ввиду конечного результата
Просто насколько он нужен мне тяжело оценить, поскольку эти реактивы мне малознакомы.
Гидроксисукцинидные эфиры очень дороги, поскольку флуресцентное соединение глюкозамина будет использоваться как компонент для питательной среды для растений, поэтому миллиграммы это мало, необходимы граммы хотя бы 1-2.
По гидроксиламину спасибо.
И по тиоглиголю я его так-то тоже заказал, но что то учитывая что я не собираюсь очищать результат, не уверен я в его безопастности имеется ввиду конечного результата
Просто насколько он нужен мне тяжело оценить, поскольку эти реактивы мне малознакомы.
Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину
Тем более я так понимаю меркаптоэтанол нужен для связывания EDAC, но EDAC я так понимаю взаимодействует только с карбонильной группой, и с глюкозамином ему не с чем реагировать, поэтому он наверное указан для общей реакции карбоксифлуоресцеина с аминными группами разных соединений, и поэтому они связывают остатки EDAC
Re: Карбоксифлуоресцеин к глюкозамину
Думаю можно и без дорогого EDAC.
Сначала сварить отдельно гидроксисукцинимидный эфир карбоксифлуоресценина,
например с TFAOSu в пиридине, выделить его, перекристаллизовать.
А далее скрещивать с чем надо, в смеси бикарбоната с чем то типа ТГФа (если акт эфир в нем растворим).
Только желательно взять избыток, 15-20% от теории, того чего не жалко, но лучше глюкозамина.
Мониторить исчезновение эфира по ТСХ.
По окончании реакции реакц массу подкислить и отгонять орг растворитель на роторе.
В идеале продукт должен выпасть, а избыток глюкозамина остаться в растворе.
Сначала сварить отдельно гидроксисукцинимидный эфир карбоксифлуоресценина,
например с TFAOSu в пиридине, выделить его, перекристаллизовать.
А далее скрещивать с чем надо, в смеси бикарбоната с чем то типа ТГФа (если акт эфир в нем растворим).
Только желательно взять избыток, 15-20% от теории, того чего не жалко, но лучше глюкозамина.
Мониторить исчезновение эфира по ТСХ.
По окончании реакции реакц массу подкислить и отгонять орг растворитель на роторе.
В идеале продукт должен выпасть, а избыток глюкозамина остаться в растворе.
Ищите и обрящите.
Кто сейчас на конференции
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 32 гостя