Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
С зафармалиниными белками вы ничего не сделаете, неразрушив мозг нахрен. Можно конечно попробовать испльзоввать цвитергент типа CHAPS, но не думаю, что это существенно поможет.
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
я думаю сначала вводят Dil, а экспозицию выдерживают в формалине
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Если Dil для трассировки требуются часы, то формалину для превращения белков в нерастворимую и непроходимую шнягу - минуты.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Нет, к сожалению DiI вводят в препарат мозга минимум сутки полежавший в формалине. И для миграции DiI в заформалиненом материале требуются месяцы. Там еще многое зависит от фазового состояния мембраны и длинны хвоста самой молекулы DiI. Есть структурные аналоги с С12 хвостами (12 атомов углерода, классический DiI как у меня c C18) и есть еще fastDiI с двойной С-С связью в хвосте которые мигрируют быстрее но принципиально это дела не меняет. Если бы был способ избавится от этих мембранных белков не превращая мозг в труху то миграция возможно шла бы на порядки быстрее, но как я и подозревал такого способа нет. Остается только играть на температуре и с электрическими полями, или пробовать с вакуумированием эта идея неплохая но ее то же надо проверять экспериментально.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
PS. Была одна работа где сначала вводили DiI в свежеизвлеченный мозг а потом фиксировали спустя 36 часов, но в той статье не было (это вообще часто бывает) никаких качественных фотографий которые позволяли бы судить о том как это сработало. Но по другим объектам (суспензия клеток) я не раз лично убеждался что даже сутки действуют на мембрану мертвой клекти крайне отрицательно, в поляризационном свете мембраны таких клеток выглядят очень нечеткими и размытыми (в отличие от свежефиксированных, там прям резкие различия)) так что это не выход - вводить маркер в свежую ткань и откладывать фиксацию. Мембрана как я заметил вообще очень хрупкая структура.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Статья была если интересно из
Journal of Neuroscience Methods 103 (2000)
Neural tract tracing using Di-I: a review and a new method to make fast Di-I faster in human brain
D. Larry Sparks *, Lih-Fen Lue, Timothy A. Martin, Joseph Rogers Haldeman
Journal of Neuroscience Methods 103 (2000)
Neural tract tracing using Di-I: a review and a new method to make fast Di-I faster in human brain
D. Larry Sparks *, Lih-Fen Lue, Timothy A. Martin, Joseph Rogers Haldeman
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
а почему нельзя прижизненно вводить?
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
PS. Буду очень благодарен если мне кинут ссылочку на этот метод вакуумирования в применении к биологическим объектам)
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Можно, но это уже стереотаксис, а со стереотаксисом лучше использовать другие маркеры. Стереотаксис просто это сильное ограничение по видам - нужны атласы которые разработаны всего для 5 видов - и стереотаксис это сложная нейрохирургическая операция, а с фиксированным мозгом все гораздо проще.
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
проще, что имеете в виду? препарат можно вертеть руками? но никто не запрещает спилить крышу черепа и всё станет видным!Алексей Лк писал(а): ↑Вт апр 24, 2018 9:43 pmМожно, но это уже стереотаксис, ... а с фиксированным мозгом все гораздо проще.
PS а про вакуумирование я только вчера придумал (ссылок не будет), так что вам все карты в руки
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Со стереотаксисом не получится ограничится просто спиливанием крыши черепа, там же глубинные структуры мозга, т.е полюбому нужна стереотаксическая установка, и нужно знать координаты нужной структуры, для этого и нужны стереотаксические атласы. С фиксированным препаратом проще так как маркер наносится сразу на срез мозга в нужную структуру. Работы с инъекциями DiI в живой мозг то же были, и там действительно диффузия была быстрее - в пределах трех - семи дней, но так как в живом мозгу постоянно происходит обмен мембранами между нейронами то результаты были искаженными, поэтому классические трейсеры тут более приемлемы. С вакуумированием буду искать)
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Можете попробовать использовать обработку протеазами пепсином в кислых условиях или протеиназой К в физиологических условиях. Тут главное подобрать концентрацию и время обработки ферментом, что бы они не превратил препарат в кисель, но и белки что бы подрезал. Ну и CHAPS можно попробовать.Алексей Лк писал(а): ↑Вт апр 24, 2018 9:20 pmЕсли бы был способ избавится от этих мембранных белков не превращая мозг в труху то миграция возможно шла бы на порядки быстрее, но как я и подозревал такого способа нет.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Да спасибо я так и сделаю, уже второй способ есть (вместе с вакууимрованием) который можно проверить)
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
очень интересны результаты проверок, будем ждать результатов.
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Да, как только разберусь с электрическим полем сразу начну тестировать по другим альтернативам)
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Где-то слышал, что Pluronic L31 или L61 подрывают мембрану, делая её проницаемой для антираковых препаратов. In vitro вроде получалось у людей (где-то в сети целый диссер висит на эту тему), in vivo не вышло из-за умеренно высокой токсичности. Хотя там дело было вроде в инактивации P-гликопротеида. Оцените это дело, может, полезно будет.
-
- Сообщения: 80
- Зарегистрирован: Чт апр 05, 2018 6:46 pm
Re: Способы ускорения диффузии синтетического липида DiI в биологических мембранах
Спасибо за ответ) токсичные вещества меня несколько поднапрягают.... Я в свое время отказался от использования диаминбензидина по этой причине перейдя на тетраметилбензидин) с токсичными веществами при отсутсвии гарантии результата лучше не иметь дел) но все равно спасибо за инфу).
Кто сейчас на конференции
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 27 гостей