Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Приветствую уважаемых участников форума!
Хотел бы адресовать Вам следующий вопрос:
будет ли инициироваться перекисное окисление липидов при нагревании?
Честно говоря, вопрос имеет для меня не теоретическое, а практическое значение.
Я собираюсь определять концентрацию свободных липидных гидроперекисей в сыворотке и плазме крови. Методика, которую собираюсь использовать для этого, предусматривает предварительную экстракцию липидов из образцов методом Фолча (смесью хлороформа и метанола 2:1). Получаемую при этом хлороформную липидсодержащую фракцию (в которую будут уходить и липидные гидроперекиси) нужно концентрировать (т.е. удалять хлороформ) посредством vacuum-drying и далее концентрат (или липидный осадок) растворять в метаноле.
Но моя проблемка в том, что у меня нет в распоряжении оборудования для vacuum-drying (как нет возможности упаривать хлороформ в токе азота, аргона и т.п. при комнатной температуре).
Вот я и подумал: а что если удалять хлороформ нагреванием этой хлороформной фракции до температуры кипения оного (61,2 гр. Ц)?
И вот, если так делать, не будут ли гидроперекиси образовываться уже in vitro вследствие относительно продолжительного (1-1,5 часа) нагревания на воздухе до 60 с лишним градусов?
Спасибо!
Хотел бы адресовать Вам следующий вопрос:
будет ли инициироваться перекисное окисление липидов при нагревании?
Честно говоря, вопрос имеет для меня не теоретическое, а практическое значение.
Я собираюсь определять концентрацию свободных липидных гидроперекисей в сыворотке и плазме крови. Методика, которую собираюсь использовать для этого, предусматривает предварительную экстракцию липидов из образцов методом Фолча (смесью хлороформа и метанола 2:1). Получаемую при этом хлороформную липидсодержащую фракцию (в которую будут уходить и липидные гидроперекиси) нужно концентрировать (т.е. удалять хлороформ) посредством vacuum-drying и далее концентрат (или липидный осадок) растворять в метаноле.
Но моя проблемка в том, что у меня нет в распоряжении оборудования для vacuum-drying (как нет возможности упаривать хлороформ в токе азота, аргона и т.п. при комнатной температуре).
Вот я и подумал: а что если удалять хлороформ нагреванием этой хлороформной фракции до температуры кипения оного (61,2 гр. Ц)?
И вот, если так делать, не будут ли гидроперекиси образовываться уже in vitro вследствие относительно продолжительного (1-1,5 часа) нагревания на воздухе до 60 с лишним градусов?
Спасибо!
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
а что по этому поводу сам Фолч думает? или это модификация Фолч-Demiurg?
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Разумеется, будут. Такую методику нельзя использовать, так как могут получиться завышенные значения и толку в полученных цифрах не будет никакого.
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Наверное, ничего не думает, поскольку умер давно - в 1979 году вроде бы (метод экстракции липидов по Фолчу ещё в 50-е годы прошлого века был предложен).
Я подразумевал, что липиды (из анализируемых на гидроперекиси образцов) предварительно экстрагируются хлороформ-метанольной смесью (этим самым методом Фолча). А уже в выделенной липидной фракции и определяются гидроперекиси соответствующим методом (с ксиленоловым оранжевым; гидроперекиси окисляют Fe(II) до Fe(III), а Fe(III) реагирует с ксиленоловым оранжевым и образует хромоген, детектируемый колориметрически), не имеющим к Фолчу (и к Demiurg'у) никакого отношения. Кому не лень, то можно посмотреть статью.
Я подразумевал, что липиды (из анализируемых на гидроперекиси образцов) предварительно экстрагируются хлороформ-метанольной смесью (этим самым методом Фолча). А уже в выделенной липидной фракции и определяются гидроперекиси соответствующим методом (с ксиленоловым оранжевым; гидроперекиси окисляют Fe(II) до Fe(III), а Fe(III) реагирует с ксиленоловым оранжевым и образует хромоген, детектируемый колориметрически), не имеющим к Фолчу (и к Demiurg'у) никакого отношения. Кому не лень, то можно посмотреть статью.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.
- Magic Methyl
- Сообщения: 1647
- Зарегистрирован: Вт авг 07, 2018 7:06 pm
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Ничего хорошего коллега при этом не выйдет, - нужно удалять растворители в вакууме при комнатнойВот я и подумал: а что если удалять хлороформ нагреванием этой хлороформной фракции до
температуры кипения оного (61,2 гр. Ц)?
температуре как сказано в методике, - иначе результат будет совершенно недостоверным. Расскажите
про свое оборудование, - почему нет возможности делать работу как надо, и мы постараемся дать Вам
советы как можно сделать простейший прибор, который позволит Вам хотя бы намного меньшей погреш-
ностью воспроизвести методику.
Самый главный вопрос - какие объемы экстракта? Если мл-десятки мл это одно, если сотни это другое.
Первое что приходит на ум, если Вы совсем не химик - купить баллон небольшого объема с аргоном или
азотом/углекислотой и просто удалять растворитель током газа в виалке (в тяге). CHCl3 летит прилично,
а вот МеОН не очень. Более приемлемый вариант, - если есть поблизости кран с водой, - прикрутите к
нему водоструйный насос, свой экстракт переливайте в 20..50..100 мл круглодонку и откачивайте при КТ
до тех пор пока растворители не улетят - но это для небольшого объема.
С уважением.
Litterarum radices amarae, fructus dulces sunt
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Предлагаемые Вами упрощённые методы нужно будет долго и тщательно проверять на адекватность, изучать влияние разных факторов и пр. Если было бы всё так просто, не использовали бы сложное и дорогое оборудование, это не тот случай, где можно что-то делать "на коленке".Magic Methyl писал(а): ↑Вт окт 09, 2018 10:01 amПервое что приходит на ум, если Вы совсем не химик - купить баллон небольшого объема с аргоном или
азотом/углекислотой и просто удалять растворитель током газа в виалке (в тяге). CHCl3 летит прилично,
а вот МеОН не очень. Более приемлемый вариант, - если есть поблизости кран с водой, - прикрутите к
нему водоструйный насос, свой экстракт переливайте в 20..50..100 мл круглодонку и откачивайте при КТ
до тех пор пока растворители не улетят - но это для небольшого объема.
I D E A = A u
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
не зря же Фолч экстрагировал в вакууме, я тоже за водоструйник, дешево и сердито. как вариант на авито б/у вакуум насос купить от холодильщиков, они им воздух из радиаторов откачивают перед заправкой фреоном.
ps в приведенной цитате
ps в приведенной цитате
про степень разряжения ничего не говорят, я думаю, водоструйного насоса хватитNote. If the starting sample is high in lipid content (e.g., blood, brain, intestine, adipose tissue), measure the volume of the collected upper aqueous layer, reextract it with 1/2 volume K. Grintzalis et al. / Free Radical Biology and Medicine 59 (2013) 27–35 31 CHCl3, combine the resulting CHCl3 layers, and concentrate/ isolate their lipid content by vacuum-drying. Alternatively, dilute the initial sample volume and epeat step 2.
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.
- Magic Methyl
- Сообщения: 1647
- Зарегистрирован: Вт авг 07, 2018 7:06 pm
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Ну почему же, - в методике ведь действительно нет указаний на то как производиться vacuum-dryingchemist писал(а): ↑Вт окт 09, 2018 7:08 pmПредлагаемые Вами упрощённые методы нужно будет долго и тщательно проверять на адекватность, изучать влияние разных факторов и пр. Если было бы всё так просто, не использовали бы сложное и дорогое оборудование, это не тот случай, где можно что-то делать "на коленке".
Для удаления летучих растворителей вакуума водоструйного насоса более чем достаточно, - поэтому я
его и предложил. Даже больше скажу, - автор методики скорее всего так и делал, - либо на мембранном
либо на водоструйном насосе, так как лиофилку тут использовать никак нельзя. Единственное, - потом,
в остатке следы растворителя все же останутся, - но тут уже другой вопрос, насколько полное их удаление
требуется для дальнейших операций.
С уважением.
Litterarum radices amarae, fructus dulces sunt
Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro
Из начального поста ТС не ясно какое именно оборудование для vacuum-drying он имеет в виду, вот и подумалось, что что-то недешёвое, в инертной атмосфере.
I D E A = A u
Кто сейчас на конференции
Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 35 гостей