Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

вопросы современной биологической химии, молекулярной биологии, химической энзимологии и смежных наук
biochem, molbio, chemical enzymology and related discussions for professionals
Ответить
Demiurg
Сообщения: 141
Зарегистрирован: Вт мар 09, 2010 3:33 pm

Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение Demiurg » Пн окт 08, 2018 11:12 pm

Приветствую уважаемых участников форума!

Хотел бы адресовать Вам следующий вопрос:

будет ли инициироваться перекисное окисление липидов при нагревании?

Честно говоря, вопрос имеет для меня не теоретическое, а практическое значение.

Я собираюсь определять концентрацию свободных липидных гидроперекисей в сыворотке и плазме крови. Методика, которую собираюсь использовать для этого, предусматривает предварительную экстракцию липидов из образцов методом Фолча (смесью хлороформа и метанола 2:1). Получаемую при этом хлороформную липидсодержащую фракцию (в которую будут уходить и липидные гидроперекиси) нужно концентрировать (т.е. удалять хлороформ) посредством vacuum-drying и далее концентрат (или липидный осадок) растворять в метаноле.
Но моя проблемка в том, что у меня нет в распоряжении оборудования для vacuum-drying (как нет возможности упаривать хлороформ в токе азота, аргона и т.п. при комнатной температуре).
Вот я и подумал: а что если удалять хлороформ нагреванием этой хлороформной фракции до температуры кипения оного (61,2 гр. Ц)?

И вот, если так делать, не будут ли гидроперекиси образовываться уже in vitro вследствие относительно продолжительного (1-1,5 часа) нагревания на воздухе до 60 с лишним градусов?

Спасибо!

Аватара пользователя
bigM
Сообщения: 929
Зарегистрирован: Ср фев 15, 2017 2:05 am

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение bigM » Вт окт 09, 2018 12:35 am

а что по этому поводу сам Фолч думает? или это модификация Фолч-Demiurg?
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.

Nickolas
Сообщения: 624
Зарегистрирован: Пн авг 27, 2007 8:15 pm

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение Nickolas » Вт окт 09, 2018 9:38 am

Разумеется, будут. Такую методику нельзя использовать, так как могут получиться завышенные значения и толку в полученных цифрах не будет никакого.

Demiurg
Сообщения: 141
Зарегистрирован: Вт мар 09, 2010 3:33 pm

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение Demiurg » Вт окт 09, 2018 9:51 am

Наверное, ничего не думает, поскольку умер давно - в 1979 году вроде бы (метод экстракции липидов по Фолчу ещё в 50-е годы прошлого века был предложен).
Я подразумевал, что липиды (из анализируемых на гидроперекиси образцов) предварительно экстрагируются хлороформ-метанольной смесью (этим самым методом Фолча). А уже в выделенной липидной фракции и определяются гидроперекиси соответствующим методом (с ксиленоловым оранжевым; гидроперекиси окисляют Fe(II) до Fe(III), а Fe(III) реагирует с ксиленоловым оранжевым и образует хромоген, детектируемый колориметрически), не имеющим к Фолчу (и к Demiurg'у) никакого отношения. Кому не лень, то можно посмотреть статью.
У вас нет необходимых прав для просмотра вложений в этом сообщении.

Аватара пользователя
Magic Methyl
Сообщения: 367
Зарегистрирован: Вт авг 07, 2018 7:06 pm

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение Magic Methyl » Вт окт 09, 2018 10:01 am

Вот я и подумал: а что если удалять хлороформ нагреванием этой хлороформной фракции до
температуры кипения оного (61,2 гр. Ц)?
Ничего хорошего коллега при этом не выйдет, - нужно удалять растворители в вакууме при комнатной
температуре как сказано в методике, - иначе результат будет совершенно недостоверным. Расскажите
про свое оборудование, - почему нет возможности делать работу как надо, и мы постараемся дать Вам
советы как можно сделать простейший прибор, который позволит Вам хотя бы намного меньшей погреш-
ностью воспроизвести методику.
Самый главный вопрос - какие объемы экстракта? Если мл-десятки мл это одно, если сотни это другое.
Первое что приходит на ум, если Вы совсем не химик - купить баллон небольшого объема с аргоном или
азотом/углекислотой и просто удалять растворитель током газа в виалке (в тяге). CHCl3 летит прилично,
а вот МеОН не очень. Более приемлемый вариант, - если есть поблизости кран с водой, - прикрутите к
нему водоструйный насос, свой экстракт переливайте в 20..50..100 мл круглодонку и откачивайте при КТ
до тех пор пока растворители не улетят - но это для небольшого объема.
С уважением.
Litterarum radices amarae, fructus dulces sunt

Аватара пользователя
chemist
Сообщения: 8790
Зарегистрирован: Пн июл 26, 2004 2:14 am

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение chemist » Вт окт 09, 2018 7:08 pm

Magic Methyl писал(а):
Вт окт 09, 2018 10:01 am
Первое что приходит на ум, если Вы совсем не химик - купить баллон небольшого объема с аргоном или
азотом/углекислотой и просто удалять растворитель током газа в виалке (в тяге). CHCl3 летит прилично,
а вот МеОН не очень. Более приемлемый вариант, - если есть поблизости кран с водой, - прикрутите к
нему водоструйный насос, свой экстракт переливайте в 20..50..100 мл круглодонку и откачивайте при КТ
до тех пор пока растворители не улетят - но это для небольшого объема.
Предлагаемые Вами упрощённые методы нужно будет долго и тщательно проверять на адекватность, изучать влияние разных факторов и пр. Если было бы всё так просто, не использовали бы сложное и дорогое оборудование, это не тот случай, где можно что-то делать "на коленке".
I D E A = A u

Аватара пользователя
bigM
Сообщения: 929
Зарегистрирован: Ср фев 15, 2017 2:05 am

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение bigM » Вт окт 09, 2018 9:07 pm

не зря же Фолч экстрагировал в вакууме, я тоже за водоструйник, дешево и сердито. как вариант на авито б/у вакуум насос купить от холодильщиков, они им воздух из радиаторов откачивают перед заправкой фреоном.
ps в приведенной цитате
Note. If the starting sample is high in lipid content (e.g., blood, brain, intestine, adipose tissue), measure the volume of the collected upper aqueous layer, reextract it with 1/2 volume K. Grintzalis et al. / Free Radical Biology and Medicine 59 (2013) 27–35 31 CHCl3, combine the resulting CHCl3 layers, and concentrate/ isolate their lipid content by vacuum-drying. Alternatively, dilute the initial sample volume and epeat step 2.
про степень разряжения ничего не говорят, я думаю, водоструйного насоса хватит
Не красота спасёт мир, а транквилизаторы.

Аватара пользователя
Magic Methyl
Сообщения: 367
Зарегистрирован: Вт авг 07, 2018 7:06 pm

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение Magic Methyl » Ср окт 10, 2018 10:00 am

chemist писал(а):
Вт окт 09, 2018 7:08 pm
Предлагаемые Вами упрощённые методы нужно будет долго и тщательно проверять на адекватность, изучать влияние разных факторов и пр. Если было бы всё так просто, не использовали бы сложное и дорогое оборудование, это не тот случай, где можно что-то делать "на коленке".
Ну почему же, - в методике ведь действительно нет указаний на то как производиться vacuum-drying :dontknow:
Для удаления летучих растворителей вакуума водоструйного насоса более чем достаточно, - поэтому я
его и предложил. Даже больше скажу, - автор методики скорее всего так и делал, - либо на мембранном
либо на водоструйном насосе, так как лиофилку тут использовать никак нельзя. Единственное, - потом,
в остатке следы растворителя все же останутся, - но тут уже другой вопрос, насколько полное их удаление
требуется для дальнейших операций.
С уважением.
Litterarum radices amarae, fructus dulces sunt

Аватара пользователя
chemist
Сообщения: 8790
Зарегистрирован: Пн июл 26, 2004 2:14 am

Re: Перекисное окисление липидов при нагревании in vitro

Сообщение chemist » Ср окт 10, 2018 11:22 am

Из начального поста ТС не ясно какое именно оборудование для vacuum-drying он имеет в виду, вот и подумалось, что что-то недешёвое, в инертной атмосфере.
I D E A = A u

Ответить

Вернуться в «биохимия и молекулярная биология / biochemistry and molecular biology»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: нет зарегистрированных пользователей и 0 гостей