Пегилированный интерферон

[alivka67]

Добрый день, коллеги!
В данный момент пишу диплом. Возникла проблема на фоне отсутствия информации. Необходима методика количественного определения пегилированного интерферона в глф, точнее в лиофилизате. Перечитав множество статей, патентов и всевозможных фармакопей я ничего не смогла найти. Может кто-нибудь сталкивался с подобными вопросами и сможет меня направить, где ещё покопаться и поискать?
Буду очень благодарна за советы и ответы.

[avor]

ВЭЖХ на ПЭГ интерферон
И другие способы анализа PEG белков

[Zabolot]

ВЭЖХ - это правильно. Помимо ОФ ВЖХ, может, и ионообменная хорошо себя покажет.
Электрофорез нужно ставить обязательно! Без этого диплом не примут)))
Если найдется точная корреляция между кол-вом ПЭГа и белка в лиофилизате и кол-вом ПЭГ-ИФН (а это можно выяснить), и нет мешающих реагентов, в дальнейшем можно попробовать просто определять только ПЭГ и белок спектрофотометрически (например, по реакции с иодным реагентом), и пересчитывать на ПЭГ-ИФН.
Навскидку про ПЭГ:
0,3 мл субстрата с конц. ПЭГа 20-100 мкг/мл
1 мл насыщ. LiCl (примерно 50% р-р, он нужен, не спрашивайте почему)
2 мл 5% трихлоруксусной кислоты
0,2 мл йодного реагента (0,5 гI2 + 5 г KI на 100 мл H2O)
Перемешали, подержали 10 мин, в кювету на 10 мм, смотреть на длине волны 510 нм.
С белком аналогично - по Брэдфорду, Флори, поглощению на 280 нм и тд