задачи по биохимии

[yulenka172]

Здравствуйте! Помогите,пожалуйста,объяснить решение!Заранее,спасибо!

Тетрапептид содержит аланин, лизин, пролин и валин. В результате реакции тетрапептида с динитрофторбензолом и последующего гидролиза ДНФ-пептида раствором соляной кислоты (6 моль/л) был получен ДНФ-аланин. Гидролиз тетрапептида трипсином дает два соединения, одно из которых окрашивается нингидрином в сине-фиолетовый, а другое – в желтый цвет. Какова первичная структура тетрапептида?

[Vittorio]

Ок. Что такое нингидрин? о чем свидетельствует изменение окраски при реакции с нингидрином? что делает трипсин?

[yulenka172]

Нингидрин-сильный окислитель...изменение окраски свидетельствует о наличии аминокислот...а трипсин он расщепляет связи лизина.

[Vittorio]

Хорошо. Теперь давайте Вы прочитаете про нингидриновую реакцию и мы тогда определимся, какая окраска чему соответствует.
Смысл задачи в том, чтобы установить последовательность аминокислот. Вот вы можете сказать, где находится аланин?

[yulenka172]

При нагревании в щелочной среде нингидрина с веществами, имеющими первичные аминогруппы (—NH2), образуется продукт, который имеет устойчивую интенсивную сине-фиолетовую окраску. Н. р. используется также для определения вторичных аминогрупп (>NH) в иминокислотах — пролине и оксипролине;в этом случае образуется продукт ярко-жёлтого цвета.
Т.к. динитрофторбензол-реагент на свободную альфа-аминогруппу,то у нас N-конец-аланин.?!

[avor]

Уже неплохо - аланин, правда, если честно, я не уверен в том, что ДНФ не будет реагировать с боковой аминогруппой лизина.

[avor]

Честно я в недоумении трипсин НЕ гидолизут связь лизин пролин. Поэтому пролиновя реакция после гидролиза трипсином не возможна, сплошной курьез получается.

[yulenka172]

Вот какой я ответ дала своему преподавателю...но он сказал,что не верно.может вы подскажете в чем ошибка??


Тетрапептид-это цепочка последовательно связанных аминокислот. На одном конце имеется свободная аминогруппа в альфа-положении, на другом конце свободной остается карбоксильная группа. 2,4-динитрофторбензол - реагент на свободную альфа-аминогруппу. Таким образом, у нас N-конец - аланин. Далее, трипсин это фермент, который расщепляет преимущественно связи лизина. Поскольку при гидролизе трипсином образовалось два дипептида , один из которых с нингидрином дает пурпур Руэмана, а другой не дает, то это лишь говорит в пользу расщепления на два фрагмента аланин-лизин и пролин-валин. Дипептид, содержащий аланин и лизин имеет две свободных аминогруппы 1-ая аланина, как N-концевой аминокислоты и 2-ая лизина (поскольку у оного их две, одна задействована в пептидной связи, а вторая свободна). А это говорит о том что пурпур Руэмана с нингидрином образуют обе аминогруппы , отсюда синяя окраска.Другой дипептид обстоит дело так, что с одного конца оказывается пролин, который не имеет аминогруппы а только азот в цикле, а с другого конца валин, аминогруппой повязан с пролином и свободным карбоксилом. Потому что если бы оказалась свободной аминогруппа валина, то и второе соединение было бы не желтого цвета.Таким образом с нингидрином этот дипептид образует желтую окраску.
Таким образом, аминокислоты располагаются следующим порядком NH2-ala-lys-pro-val-COOH

[avor]

Повторюсь трипсин не гидролизует пролиновую пептидную связь. Поэтому непонятно что имелось ввиду. Вроде как условие не корректно.

[yulenka172]

Мм...и что же теперь делать?(

[Cherep]

прийти к преподу со ссылкой на авторитетный источник, что трипсин не гидролизует

[yulenka172]

всё равно какое-то решение есть...))

[yulenka172]

а может с этим поможете??

Почему нормально функционировать могут только ассиметрические мембраны??

[Vittorio]

Уже неплохо - аланин, правда, если честно, я не уверен в том, что ДНФ не будет реагировать с боковой аминогруппой лизина.

а в условии нет ограничений, что с ДНФ будет получаться только ДНФ_аланин

Повторюсь трипсин не гидролизует пролиновую пептидную связь. Поэтому непонятно что имелось ввиду. Вроде как условие не корректно.

Таки да. Интересная задача.
Если предположить о том, что автор задачи не знал, что трипсин не гидролизует карбоксильный конец лизина, если за ним идет пролин, то ответ может быть и таким:
NH2-ala-val-lys-pro-COOH

[yulenka172]

Таки да. Интересная задача.
Если предположить о том, что автор задачи не знал, что трипсин не гидролизует карбоксильный конец лизина, если за ним идет пролин, то ответ может быть и таким:
NH2-ala-val-lys-pro-COOH

А почему валин после аланина??или я не понимаю......

[Vittorio]

ну аланин концевой, это выяснили. Трипсин- нууу, будем считать, что в условиях задачи он гидролизует связь Лиз-Про . Два продукта, которые получатся при гидролизе: один содержит амино-концевой аланин, и дает синефиолетовую окраску с нингидрином. Второй - желтая окраска - должен либо содержать пролин, либо быть пролином. Я не биохимик+учился давно, не могу сказать, за счет чего образуется желтое окрашивание в случае пролина - участвует ли только NH, или и карбоксил тоже, и дают ли желтую окраску олигопептиды с концевым пролином. Для простоты принял, что второй продукт - это пролин. Тогда валин должен быть между лизином и аланином. Как-то так.

[Vittorio]

Поскольку при гидролизе трипсином образовалось два дипептида

почему Вы решили, что это именно дипептиды? в условии- два соединения.

[yulenka172]

ну аланин концевой, это выяснили. Трипсин- нууу, будем считать, что в условиях задачи он гидролизует связь Лиз-Про . Два продукта, которые получатся при гидролизе: один содержит амино-концевой аланин, и дает синефиолетовую окраску с нингидрином. Второй - желтая окраска - должен либо содержать пролин, либо быть пролином. Я не биохимик+учился давно, не могу сказать, за счет чего образуется желтое окрашивание в случае пролина - участвует ли только NH, или и карбоксил тоже, и дают ли желтую окраску олигопептиды с концевым пролином. Для простоты принял, что второй продукт - это пролин. Тогда валин должен быть между лизином и аланином. Как-то так.

ладно,спасибо за помощь!!!.попробую показать это решение.ну если и оно не верно,тогда я уже не знаю,что и делать!))

[Vittorio]

ок. отпишитесь о результатах, пожалуйста.

[yulenka172]

Подскажите,пожалуйста!
Какой из белков-пепсин (pI=2,75) или казеин (pI=4,6)-и почему более эффективен во взаимодействии с солями стронция?