Новости химической науки > Способ измерить степень бессмертия клетки

Исследователи из США улавливают крошечные количества ДНК в попытке разработать метод определения ферментной активности, связанной развитием опухолей.

Яромир Ружичка (Jaromir Ruzicka) и соавторы из Университета Вашингтона (Сиэтл) пытаются разработать автоматический метод изучения теломеразной активности, проявляющейся в 90% опухолей человека. Они разработали метод, позволяющий детектировать до 111 пикограмм ДНК.

Схема проточной кюветы, использующейся для анализа ДНК. (Рисунок © Analyst)

Теломераза – фермент, действующий на теломеры, нуклеотиды ТТАГГГ, повторяющиеся в концевых последовательностях хромосом. Всякий раз в ходе процесса репликации ДНК теломеры укорачиваются. При достижении теломерами определенной длины клетки получают сигнал о прекращении процесса деления. Однако раковые клетки практически бессмертны, так как после каждого деления теломераза способствует обратному добавлению ТТАГГГ после каждого деления. Это означает, что клетки не получают сигнала об остановке процесса деления. Таким образом, фермент представляет собой потенциальную цель для противоопухолевой терапии, таким образом, необходимо количественное изучение его активности.

Один из способов определения теломеразной активности заключается в слежении за элонгацией коротких праймеров ДНК. Протокол усиления воспроизводства теломера [telomere repeat amplification protocol (TRAP)] является наиболее обычным методом для определения такой активности, однако в этом методе используется полимеразная цепная реакция [polymerase chain reaction (PCR)]. Это делает результаты определения активности фермента неоднозначными.

В приборе, разработанном Ружичной, ДНК, связанная с биотином, пакуется на полисахаридные «бусы», упакованные в белок-стрептавадин благодаря высокому сродству биотина к этому классу белков. Использование такой методики позволило исследователям провести предварительное концентрирование ДНК для чувствительного флуоресцентного определения.

Ружичка поясняет, что разработанный метод отличается не только высокой чувствительностью, но и может быть автоматизирован. Все это позволяет оказаться на шаг ближе к практичному процессу TRAP, обходящемуся без PCR.

Источник: Analyst, 2007, 132, 818

метки статьи: #аналитическая химия, #биохимия, #медицинская химия, #молекулярная биология